Nøgleforskellen mellem Coomassie- og sølvfarvning er, at coomassie-farvning er en proteinfarvningsteknik, der bruger en coomassie brilliant blå-farvning, mens splintfarvning er en proteinfarvningsteknik, der bruger en sølvfarvning.
Proteinseparation og identifikation er kritiske trin i proteomanalyse. De har brug for højopløsningsproteinkarakterisering efter gelelektroforese. Der er adskillige farvningsteknikker, der inkluderer forskellige farvninger såsom anioniske farvestoffer (coomassie brilliant blue), metalkationer (imidazol-zink), sølvfarvning og fluorescerende farvestoffer osv. Nogle gange kan radioaktive prober også bruges. Valget af farvningsteknik afhænger af enkelheden, tilgængeligheden af billedbehandlingsudstyr i laboratoriet osv.
Hvad er Coomassie Staining?
Coomassie-farvning er en proteinfarvningsteknik, der bruger en coomassie brilliant blå farve. Det kaldes generelt coomassie blue-teknikken. Coomassie brilliant blue er det mest populære anioniske proteinfarvestof. Denne farvning farver norm alt næsten alle proteiner med god kvantitativ linearitet ved middel følsomhed. Coomassie brilliant blue stain binder uspecifikt til næsten alle proteiner. Der er to forskellige coomassie brilliant blue bejdsevarianter: R-250 og G-250. R-250 giver kortere farvningstider, mens G-250 er tilgængelig i mere følsomme og miljøvenlige formuleringer.
Figur 01: Coomassie Staining
Coomassie-farvestoffer er meget populære i massespektrometriundersøgelser og proteinidentifikationsundersøgelser. Desuden er bio-safe coomassie stain en ikke-farlig formulering af coomassie blue G-250, der i øjeblikket er tilgængelig på markedet. Fordelen ved denne formulering er, at den kun kræver vand til skylning og affarvning. Biosikker coomassie-farve giver en følsomhed svarende til konventionel coomassie-blå G-250, men bedre end coomassie-farve R-250. Desuden har den en enklere og hurtigere farvningsprotokol end den konventionelle Coomassie blue G-250. Ulempen ved coomassie blå farvning er, at den er mindre følsom sammenlignet med sølvfarvning. Coomassie blå farvning er cirka 50 gange mindre følsom end sølvfarvning. Men på grund af dens enkelhed i indbinding foretrækkes den i mange undersøgelser.
Hvad er sølvfarvning?
Sølvfarvning er en proteinfarvningsteknik, der bruger en sølvfarvning. Sølvfarvning bruges til at farve både agarose- og polyacrylamidgeler. Sølvfarvningen af protein i agarosegeler blev først udviklet i 1973 af Kerenyi og Gallyas. Senere blev det tilpasset til proteiner i polyacrylamidgeler, der bruges i SDS-PAGE. I øjeblikket bruges sølvfarvning også til farvning af DNA eller RNA. For at farve gelerne inkuberes gelerne med sølvnitratopløsning i denne metode. Sølvfarvning pletter de steder, hvor proteiner er til stede fra brun til sort.
Figur 02: Sølvfarvning
Intensiteten af sølvfarvningen afhænger af proteinets primære struktur. Desuden kan renheden af de anvendte beholdere og renheden af reagenser også påvirke kvaliteten af sølvfarvning. Ulempen ved sølvfarvning er imidlertid, at den ikke er i stand til at detektere alle proteiner, især glycoproteiner og proteiner med store modificerede grupper knyttet til deres sidekæder.
Hvad er lighederne mellem Coomassie og sølvfarvning?
- Coomassie- og sølvfarvning er to teknikker, der bruges til proteinfarvning.
- De kan farve både proteiner og DNA.
- Begge farvningsteknikker har ulemper.
- Disse teknikker har lignende trin, såsom fiksering, farvning og affarvning.
Hvad er forskellen mellem Coomassie og sølvfarvning?
Coomassie-farvning er en proteinfarvningsteknik, der bruger coomassie brilliant blue-farvning, mens sliverfarvning er en proteinfarvningsteknik, der bruger sølvfarvning. Dette er således den vigtigste forskel mellem Coomassie og sølvfarvning. Desuden er Coomassie-farvning mindre følsom end sølvfarvning.
Nedenstående infografik viser forskellene mellem Coomassie og sølvfarvning i tabelform til sammenligning side om side.
Opsummering – Coomassie vs Silver Staining
For at visualisere proteiner kan der udføres en proteinspecifik farvebindings- eller farveproducerende kemisk reaktion. Dette kaldes proteinfarvning. Coomassie og sølvfarvning er to teknikker, der bruges til proteinfarvning. Coomassie-farvningsteknik bruger coomassie brilliant blue-farvning, mens sliver-farvning bruger sølvfarvning. Så dette er den vigtigste forskel mellem Coomassie og sølvfarvning.
