Nøgleforskellen mellem direkte og indirekte immunofluorescens er, at den direkte immunofluorescens bruger et enkelt antistof, der virker mod målet af interesse, mens den indirekte immunofluorescens bruger to antistoffer til at mærke målet af interesse.
Immunofluorescens eller cellebilleddannelse er en teknik, der bruges til at mærke et specifikt målantigen med en fluorofor. Her er fluoroforen en fluorescerende kemisk forbindelse, der kan genudsende lys ved lysexcitation. Når en fluorofor binder til målantigenet, tillader den påvisningen af målmolekylet i prøven. For at beskrive det yderligere, når et antigen binder til et specifikt antistof, kan det konjugeres med fluoroforer. Derfor er det let at påvise tilstedeværelsen af målantigenet i prøven, når man observerer under fluorescensmikroskopet.
Desuden er der to typer immunfluorescens; direkte og indirekte immunfluorescens. Forskellen mellem direkte og indirekte immunfluorescens ligger hovedsageligt i antallet af anvendte antistoffer og fluorofor-konjugationen. Det vil sige, i direkte immunfluorescens konjugerer fluoroforen direkte til det primære antistof, mens fluoroforen i indirekte immunfluorescens konjugerer med det sekundære antistof.
Hvad er direkte immunfluorescens?
Immunofluorescens bruger antistoffer til at detektere specifikke målantigener. Direkte immunfluorescens er en af de to typer immunfluorescens. I direkte immunfluorescens involverer et enkelt antistof (primært antistof), og fluoroforen konjugerer direkte med det primære antistof. Efter binding af antistoffet med målantigenet udsender fluorofor fluorescens, som kan påvises med et fluorescensmikroskop.
Figur 01: Direkte immunfluorescens
Direkte immunfluorescens er imidlertid en dyr metode, da de primære konjugerede antistoffer er dyre sammenlignet med de sekundære antistoffer. Ikke desto mindre involverer det ikke et yderligere trin, altså en kortere teknik. Ydermere reduceres ikke-specifikke bindinger i direkte immunfluorescens. Arternes krydsreaktivitet er derfor lav. Men ved påvisning er følsomheden af den direkte immunfluorescens svag sammenlignet med den indirekte immunfluorescens.
Hvad er indirekte immunfluorescens?
Indirekte immunfluorescens er den anden type af immunfluorescens, der involverer to typer antistoffer såsom primære og sekundære antistoffer i mærkningen af målantigenet. I denne metode konjugerer fluoroforen med det sekundære antistof. Derfor involverer denne teknik et ekstra trin.
Figur 02: Immunfluorescens
Følsomheden er imidlertid høj i denne metode, da flere fluoroforer kan konjugeres til sekundære antistoffer, og det gør detektionen lettere. Endvidere er indirekte immunfluorescens billigere på grund af det faktum, at konjugationen af sekundære antistoffer er billigere og lettere. Sammenlignet med den direkte immunfluorescens er artskrydsreaktivitet høj i den indirekte metode.
Hvad er lighederne mellem direkte og indirekte immunfluorescens?
- De er to typer immunfluorescensteknik.
- Primære antistoffer og fluorofor involverer begge metoder.
- Antigen-antistof-reaktionen forekommer også i begge metoder.
- Yderligere anvender både direkte og indirekte immunfluorescens et fluorescensmikroskop til påvisning af antigen.
Hvad er forskellen mellem direkte og indirekte immunfluorescens?
Immunofluorescens kan være direkte eller indirekte baseret på fluorofor-konjugationen med de anvendte antistoffer. Ved direkte immunfluorescens konjugerer fluoroforen med det primære antistof, som er det enkelte antistof, der involverer denne teknik. I modsætning til det, i indirekte immunfluorescens, konjugerer fluoroforen med det sekundære antistof, som er en af de to typer antistoffer, der er involveret i teknikken. Derfor er hovedforskellen mellem direkte og indirekte immunfluorescens antistoftypen, der konjugerer med fluoroforen.
Den følgende infografik giver en side om side sammenligning af forskellen mellem direkte og indirekte immunfluorescens.
Opsummering – Direkte vs Indirekte immunfluorescens
Immunofluorescens er en teknik, der bruges til at påvise tilstedeværelsen af specifikke antigener i en prøve. Denne teknik bruger specifikke antistoffer. Derfor konjugerer antistofferne i dette med fluoroforer for at detektere dem ved hjælp af et fluorescerende mikroskop. Desuden er der to typer immunfluorescens, nemlig direkte og indirekte immunfluorescens. Direkte immunfluorescens involverer et enkelt antistof og fluorofor direkte konjugeret til dette antistof. Indirekte immunfluorescens involverer to antistoffer; primær og sekundær og fluorofor konjugeret til det sekundære antistof. Da flere sekundære antistoffer kan binde til et primært antistof, og flere fluoroforer kan konjugere med sekundære antistoffer, er indirekte immunfluorescens en mere følsom metode end den direkte metode. Desuden er den indirekte metode billigere end den direkte metode. Dette er således forskellen mellem direkte og indirekte immunfluorescens.
