Nøgleforskel – RNASE A vs RNASE H
Ribonukleaserne er nukleaser, der specifikt nedbryder RNA til mindre enheder. De kan opdeles i to kategorier; endoribonukleaser og exoribonukleaser. Endoribonuklease er en endonuklease, der enten kan nedbryde enkeltstrenget eller dobbeltstrenget RNA. Det sp alter phosphodiester-bindingerne i en RNA-polynukleotidkæde. Eksemplerne er RNase A, RNase III, RNase T1, RNase P og RNase H. Exoribonuclease er en exonuklease, der nedbryde RNA ved at fjerne terminale nukleotider fra enten 5'enden eller 3'enden af RNA-molekylet. Eksemplerne er RNase R, RNase II, RNase D og RNase PH. Den vigtigste forskel mellem RNASE A og RNASE H er, at RNase A er en pancreas-ribonuklease, der specifikt nedbryder enkeltstrenget RNA til mindre komponenter, mens RNase H er et ikke-specifikt enzym, der sp alter RNA'et i RNA-DNA-hybrid til mindre enheder via den hydrolytiske mekanisme.
Hvad er RNASE A?
RNase A er en pancreas-ribonuklease, der specifikt sp alter de uparrede cytosin- og uracilrester i 3'-enden af enkeltstrenget RNA. RNase H virker ved en højere s altkoncentration (0,3 M eller højere NaCl-koncentration). Den hydrolytiske reaktion er to trin. Det danner et 3'-phosphoryleret produkt via 2', 3'-cyklisk monophosphat-mellemprodukt. Selvom det er specifikt for enkeltstrenget RNA ved højere s altkoncentration, kan det også nedbryde dobbeltstrenget RNA og RNA i RNA-DNA-hybrid ved lavere NaCl-koncentration (lavere end 0,3 M NaCl).
Bruce Merrifield syntetiserede først dette enzym. RNase A er et meget populært enzym i molekylær forskning. Bovin pancreas RNase A er et eksempel på RNase A. Og det er et af de hårdeste enzymer, der bruges i laboratoriet. Dette enzym behøver ikke en cofaktor for dets aktivitet. Det er et meget termostabilt enzym. RNase A er det første enzym og det tredje protein, hvortil en korrekt aminosyresekvens blev påvist. Dette enzym er meget lille med 124 aminosyrer og molekylvægt på 12600da. Og den har fire histidinrester (His 12 og His 119, som involverer en katalytisk reaktion).
Figur 01: RNase A
RNase A kan isoleres ved at koge en rå prøve. Når de koger, nedbryder alle andre enzymer resterende RNase A. RNase A er et utroligt stabilt enzym. Dette enzym hæmmer med ribonukleasehæmmerprotein, tungmetal og uridinvanadatkomplekser.
Hvad er RNase H?
RNase H er et uspecifikt ribonukleaseenzym, der kan nedbryde RNA i RNA-DNA-hybrid via hydrolytisk reaktion. RNase H sp alter 3'- O-P-bindingen af RNA i en RNA-DNA-hybrid. I sidste ende producerer det 3'OH og 5' fosfatterminerede produkter. I DNA-replikation spiller det en central rolle ved at fjerne RNA-primer, efter at nye DNA-strenge er dannet. Under laboratorieforhold nedbryder det specifikt RNA i RNA-DNA-hybrid, men ikke DNA og uhybridiseret RNA. Og dette enzym bruges norm alt til at ødelægge RNA-skabelonen, efter at den første komplementære DNA-streng er dannet under cDNA-syntese.
Figur 02: RNase H
RNase H bruges også i nukleasebeskyttelsesassays. Det kan også inkorporeres til fjernelse af poly A-hale fra mRNA. RNase H har evnen til at ødelægge det ikke-kodende RNA i og uden for cellen. Metalionerne er nødvendige som cofaktorer for denne proteinaktivitet. En chelator (EDTA) kan bruges til at hæmme RNase H-enzymet.
Hvad er lighederne mellem RNASE A og RNASE H?
- Begge er protein i naturen.
- Begge er endoribonuklease
- Begge kan nedbryde RNA.
- Begge udfører hydrolytiske reaktioner.
- Molekylære laboratorier bruger begge disse.
Hvad er forskellen mellem RNASE A og RNASE H?
RNASE A vs. RNASE H |
|
| RNase A er en pancreas-ribonuklease, der specifikt sp alter 3'-enden af uparrede cytosin- og uracilrester af enkeltstrenget RNA ved højere s altkoncentration. | RNase H er et uspecifikt ribonukleaseenzym, der kan nedbryde RNA i RNA-DNA-hybrid via hydrolytisk reaktion. |
| Arten af RNA-sp altning | |
| RNase A sp alter specifikt enkeltstrenget RNA ved højere s altkoncentration. | RNase H sp alter RNA i RNA-DNA-hybrid. |
| Need of Co-factors for Activity | |
| RNase A behøver ikke cofaktorer til sin aktivitet. | RNase H har brug for metalioner som cofaktorer for sin aktivitet. |
| Inhibitorer af proteinaktivitet | |
| Ribonukleasehæmmerprotein-, tungmetal- og uridinvanadatkomplekser hæmmer RNAse A-aktiviteten. | A chelator (EDTA) hæmmer RNase H-aktivitet. |
| RNA-primerfjernelse i DNA-replikation | |
| RNase A bruges ikke til fjernelse af RNA-primer i DNA-replikation. | RNase H bruges til fjernelse af RNA-primer i DNA-replikation |
| DNA-skabelonfjernelse i komplementær DNA (C-DNA) syntese | |
| RNase A bruges ikke til RNA-skabelonfjernelse under komplementær DNA (C-DNA) syntese. | RNase H bruges til RNA-skabelonfjernelse under komplementær DNA (C-DNA) syntese. |
| Fjernelse af poly-A-hale i mRNA hybridiseret til oligo (dt) | |
| RNase A bruges ikke til at fjerne "poly-A-hale" i mRNA hybridiseret til oligo (dt). | RNase H bruges til at fjerne "poly-A-hale" i mRNA hybridiseret til oligo (dt) |
Opsummering – RNASE A vs. RNASE H
Ribonukleaserne er nukleaseenzymer, der har evnen til at sp alte RNA i mindre enheder. De er to typer; endoribonukleaser og exoribonukleaser. Endoribonuklease er en endonuklease, som har evnen til at nedbryde enkeltstrenget eller dobbeltstrenget RNA. Og det sp alter phosphodiesterbindingen i en RNA-polynukleotidkæde. RNase A og RNase H er to endoribonukleaser. RNase A er en pancreas-ribonuklease, der specifikt sp alter uparrede cytosin- og uracilrester ved 3'-enden af det enkeltstrengede RNA ved højere s altkoncentration. RNase H er et uspecifikt ribonukleaseenzym, der kan nedbryde RNA i RNA-DNA-hybrid via hydrolytisk reaktion. Dette er forskellen mellem RNase A og RNase H.
Download PDF'en RNASE A vs RNASE H
Du kan downloade PDF-versionen af denne artikel og bruge den til offline-formål i henhold til citatnotat. Download venligst PDF-version her Forskel mellem RNASE A og RNASE H
