Nøgleforskellen mellem Elisa og Elispot er, at Elisa er et enzymkoblet immunosorbent assay, der bestemmer den samlede koncentration af udskilte signalproteiner, mens Elispot er et enzym-linked immunosorbent assay, der detekterer individuelle cytokin-secernerende celler.
Elisa og Elispot er to enzymforbundne immunosorbent-assays, der er meget brugt i medicin, plantepatologi, bioteknologi og forskellige farmaceutiske industrier. I disse teknikker påvises en proteinanalyt af et antistof rettet mod den. Elisa er den mest populære enzymbundne immunosorbentanalyse, der anvendes i laboratorier. På den anden side er Elispot et enzymbundet immunosorbent-assay, der ikke bruges i stedet for Elisa, men derimod bruges som supplement til Elisa i laboratorier.
Hvad er Elisa Assay?
Elisa er et enzym-koblet immunosorbent assay, der bestemmer den totale koncentration af udskilte signalproteiner. Det er et udbredt analytisk biokemisk assay, som først blev beskrevet af Engvall og Perlmann i 1971. Denne teknik bruger en fastfase type enzymimmunoassay til at påvise tilstedeværelsen af et specifikt protein i en flydende prøve ved hjælp af antistoffer rettet mod dette specifikke protein. Denne analyse er et almindeligt anvendt diagnostisk værktøj inden for medicin, plantepatologi og bioteknologi.
Mekanisme af ELISA-test
I det meste af ELISA-testen immobiliseres en ukendt mængde antigen på et fast underlag (mikroliterplade) i begyndelsen. Derefter påføres det matchende primære antistof over den faste støtteoverflade. Dette antistof danner et kompleks med antigenet (antigen-antistof kompleks). Det antigenbundne primære antistof kan påvises af et sekundært antistof, der er forbundet til et enzym gennem biokonjugation. I det sidste trin af Elisa-testen tilsættes et stof, der indeholder enzymets substrat. Hvis der er en korrekt binding af et primært antistof til antigenet, frembringes en påviselig farveændring af substratet. I sidste ende kvantificerer dette antigenet i prøven.
Figur 01: Forskellige typer af Elisa
Yderligere er der forskellige tilgange til Elisa, såsom direkte Elisa og indirekte Elisa. I øjeblikket bruges forskellige Elisa-tests til at påvise humane patogener som Mycobacterium tuberculosis, rotavirus, hepatitis B-virus, hepatitis C-virus, enterotoksinproducerende E.coli, HIV og SARS-CoV-2.
Hvad er Elispot Assay?
Elispot er et enzym-koblet immunosorbent assay, der detekterer individuelle cytokin-udskillende celler. Cecil Czerkinsky beskrev første gang ELISpot i 1983. Det er en type assay, der fokuserer på kvantitativ måling af hyppigheden af cytokinsekretion for en enkelt celle. Det er også klassificeret som en teknik, der bruger antistoffer til at påvise en biologisk eller kemisk proteinanalyt. Fluorospot-assay er en variation af Elispot-assayet, som bruger fluorescens til at analysere flere analytter (mere sekretive proteiner).
Mechanism of Elispot Test
I denne mekanisme tilsættes cytokinspecifikke monoklonale antistoffer til brøndene på mikroliterplader til at begynde med. Derefter tilsættes de ønskede celler, der observeres, til brøndene. Senere inkuberes cellerne. Under celleinkubationen får cellerne lov til at reagere på enhver stimuli og udskille cytokin. De cytokiner, der er blevet udskilt af de inkuberede celler, vil binde sig til antistofferne, da cellerne er omgivet af cytokinspecifikke monoklonale antistoffer.
Figur 02: Elispot Assay
For at detektere disse cytokinspecifikke monoklonale antistoffer tilsættes biotinylerede specifikke detektionsantistoffer til brønden. Biotinylerede specifikke detektionsantistoffer fanger de cytokinspecifikke monoklonale antistoffer i brøndene. Desuden tilsættes streptavidin-enzymkonjugater til brøndene for at binde med detektionsantistofferne. I det sidste trin tilsættes specifikke substrater til brøndene. Reaktionerne af enzymkonjugater og substrater producerer tydelige pletter i brøndene. Disse distinkte pletter aflæses på en automatiseret ELISpot-læser. I sidste ende vil dette yderligere beregne hyppigheden af cytokinudskillelse.
Hvad er lighederne mellem Elisa og Elispot?
- De er begge enzymforbundne immunosorberende assays.
- Begge assays detekterer specifikke proteinanalytter.
- Disse analyser bruger specifikke antistoffer til at identificere proteinanalytter.
- Begge analyser bruger enzymer og substrater.
- De bruges som et diagnostisk værktøj i medicinske laboratorier.
Hvad er forskellen mellem Elisa og Elispot?
Elisa er et enzym-koblet immunosorbent assay, der bestemmer den totale koncentration af udskilte signalproteiner. På den anden side er Elispot et enzym-koblet immunosorbent assay, der måler individuelle cytokinudskillende celler. Så dette er den vigtigste forskel mellem Elisa og Elispot. Desuden immobiliseres antigenet i Elisa-testen først på mikroliterbrøndene. I modsætning hertil immobiliseres antistoffet i Elispot-testen først på mikroliterbrøndene. Dette er således endnu en forskel mellem Elisa og Elispot.
Nedenstående infografik præsenterer en detaljeret analyse af forskellen mellem Elisa og Elispot i tabelform.
Oversigt – Elisa vs Elispot
Elisa og Elispot er to enzymforbundne immunosorbent-assays, der er meget brugt i medicin, plantepatologi, bioteknologi og forskellige farmaceutiske industrier. Elisa detekterer tilstedeværelsen af en ligand (protein) i en væskeprøve ved hjælp af antistoffer rettet mod liganden, der skal måles. Elispot-assay er en meget anvendt metode til overvågning af immunresponser. Det detekterer individuelle cytokinudskillende celler ved hjælp af antistoffer. Det er både en immunoassay- og bioassayteknik. Dette er således opsummeringen af forskellen mellem Elisa og Elispot.
