Nøgleforskellen mellem kompetitiv og ikke-kompetitiv ELISA er, at kompetitiv ELISA bruger et hæmningsantigen, mens ikke-kompetitiv ELISA ikke bruger et hæmningsantigen til analysen.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) er et immunologisk assay, der detekterer forskellige mål såsom antistoffer, antigener, proteiner og glycoproteiner. Det er en hurtig og enkel metode at udføre. Derfor bruges det oftere til forsknings- og diagnostiske formål. ELISA involverer brugen af enzymer og den specifikke binding af antistof og antigen. Baseret på hvordan reaktionerne opstår, er der fire typer ELISA: direkte ELISA, indirekte ELISA, sandwich ELISA og hæmnings-ELISA. Direkte, indirekte og sandwich-ELISA er typer af ikke-konkurrerende ELISA, mens inhiberings-ELISA er en type komplet ELISA. Hovedformålet med denne artikel er at diskutere forskellen mellem konkurrencedygtig og ikke-konkurrerende ELISA.
Hvad er Competitive ELISA?
Kompetitiv ELISA måler antigenkoncentrationen i en prøve gennem påvisning af signalinterferens. Her bruger analysen et inhibitorantigen. Derfor er det en type hæmnings-ELISA. Under denne procedure konkurrerer antigenerne i prøven med det valgte referenceantigen om binding til en specifik mængde mærket antistof. Desuden starter denne procedure med inkubationen af prøven med den overskydende mængde mærket antistof. Referenceantigenet bør også være præcoatet på en analyseplade med flere brønde. Derefter skal prøveblandingen tilsættes til analysepladen, som indeholder referenceantigenet. Frie antistoffer vil binde til referenceantigenet afhængigt af mængden af antigen i prøven. Derfor, hvis mere prøveantigen er til stede, vil mindre referenceantigen blive påvist. Det skaber således et svagere signal.
Figur 01: ELISA
Når prøven derimod indeholder mindre mængder antigen, vil mere og mere referenceantigen optage antistofferne og give et stærkt signal. Da kompetitiv ELISA giver et stærkere signal, når prøven indeholder en lav mængde antigener, er kompetitiv ELISA et meget følsomt assay, selv for prøver med et lille antal antigener.
I nogle konkurrerende ELISA-sæt bruges et mærket antigen i stedet for et mærket antistof. Her vil det mærkede antigen og prøveantigenet konkurrere om binding til det primære antistof. På samme måde, når mængden af antigen i prøven er lav, vil mængden af mærket antigen, der binder til antistoffer, være højere og skabe et stærkere signal.
Hvad er ikke-konkurrerende ELISA?
Blandt de fire typer ELISA er tre typer ikke-konkurrerende ELISA. De er direkte ELISA, indirekte ELISA og sandwich ELISA. Alle tre formater fungerer efter det fælles princip for ELISA med små forskelle i deres metoder.
Direct ELISA bruger et enzymmærket primært antistof. Derfor kræver det ikke et sekundært antistof. Derfor er direkte ELISA hurtigere end andre typer ELISA. Det primære antistof vil binde direkte til det immobiliserede målantigen, der er til stede i pladen. Derfor vil enzym-substratreaktionen finde sted, hvilket producerer et synligt signal.
Figur 02: Sandwich ELISA
I modsætning til direkte ELISA bruger indirekte ELISA et umærket primært antistof og et enzymmærket sekundært antistof. Når først det primære antistof binder til det immobiliserede antigen, binder det sekundære antistof til det primære antistof. Enzymet i det sekundære antistof vil reagere med antigenet og producere et synligt signal. Sandwich ELISA er forskellig fra både direkte og indirekte ELISA. Her immobiliseres antistoffet til væggen af assaypladen.
Hvad er lighederne mellem konkurrencedygtig og ikke-konkurrerende ELISA?
- Kompetitiv og ikke-konkurrerende ELISA er to typer immunosorberende assayteknikker.
- De er meget fleksible og følsomme teknikker.
- Yderligere er både kompetitiv og ikke-konkurrerende ELISA enzymforbundne immunoassays.
- Begge metoder genererer også et signal på grund af en enzym-substratreaktion.
Hvad er forskellen mellem konkurrencedygtig og ikke-konkurrerende ELISA?
Kompetitiv ELISA er en type ELISA, der er afhængig af færdiggørelsen mellem analytantigen og mærket antigen for en begrænset mængde specifikt antistof. På den anden side eksisterer der ingen sådan konkurrence mellem antigen af interesse og referenceantigen i ikke-kompetitiv ELISA. Dette er således den vigtigste forskel mellem konkurrencedygtig og ikke-konkurrerende ELISA. På samme måde er kompetitiv ELISA en hæmnings-ELISA, mens ikke-kompetitiv ELISA ikke er en hæmnings-ELISA. Så dette er også en forskel mellem konkurrencedygtig og ikke-konkurrerende ELISA.
Desuden er kompetitiv ELISA mere egnet til at måle en lav mængde antigen af interesse. Det er en følsom metode. På den anden side afhænger ikke-konkurrerende ELISA ikke af antallet af antigener til stede i en prøve. Derfor er dette også en forskel mellem konkurrencedygtig og ikke-konkurrerende ELISA.
Infografikken nedenfor forklarer forskellen mellem konkurrencedygtig og ikke-konkurrerende ELISA sammenlignet.
Opsummering – Konkurrencedygtig vs ikke-konkurrencedygtig ELISA
Kompetitiv og ikke-konkurrerende ELISA er de to hovedtyper af ELISA eller enzymbundne immunosorbentanalyser. For at opsummere forskellen mellem kompetitiv og ikke-kompetitiv ELISA, er den kompetitive ELISA afhængig af konkurrencen mellem antigen af interesse og referenceantigen mod den begrænsede mængde af antistoffer. Derfor er kompetitiv ELISA også navngivet som hæmnings-ELISA. På den anden side er ikke-kompetitiv ELISA afhængig af konkurrencen mellem målantigener og referenceantigener. Den bruger et overskud af mærket specifikt antistof mod analytten af interesse. Dette er således den vigtigste forskel mellem konkurrencedygtig og ikke-konkurrerende ELISA. Direkte ELISA, indirekte ELISA og sandwich-ELISA er de tre hovedtyper af ikke-konkurrerende ELISA.
