Nøgleforskellen mellem RIA og ELISA er, at radioimmunoassay (RIA) er en immunoassayteknik, der bruger radioisotoper til at detektere antigen-antistof-komplekser, mens enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) er en immunoassayteknik, der bruger enzymer til at detektere antigen. -antistofkomplekser.
Detektion af specifikke proteiner såsom antigener er ekstremt vigtigt i sygdomsdiagnostik. Derfor er RIA og ELISA to immunoassay-teknikker, der bruges i laboratorier til hurtigt at detektere specifikke proteiner, især antigener. Generelt binder et specifikt antistof til målantigenet og danner et synligt kompleks kendt som præcipitin. Disse antistof- og antigenkomplekser kan identificeres ved hjælp af forskellige teknikker. Teknikken til påvisning af antigen-antistof-komplekset ved hjælp af radioisotoper er kendt som RIA, og teknikken til påvisning af antigen-antistof-komplekset ved hjælp af enzymer er kendt som ELISA.
Hvad er RIA?
Radioimmunoassay (RIA) er en immunoassayteknik, der detekterer antigen- og antistofkomplekser ved hjælp af radioisotoper. Rosalyn Sussman Yalow udviklede denne teknik i 1960 med hjælp fra Solomon Berson. For denne bemærkelsesværdige opdagelse vandt Rosalyn Sussman Yalow Nobelprisen i medicin i 1977. I radioimmunoassay bliver en kendt mængde af et antigen typisk først gjort radioaktivt. Denne teknik bruger ofte gamma-radioaktive isotoper af jod, kaldet 125-I, til at mærke antigener. Disse radioisotoper binder sig norm alt til antigenets tyrosinaminosyre. Derefter blandes det radioaktivt mærkede antigen med antistof. Som et resultat binder det radiomærkede antigen og antistof specifikt til hinanden.
Senere tilsættes en prøve af serum, der indeholder en ukendt mængde af det samme antigen. Dette får det umærkede antigen fra serumet til at konkurrere med det radiomærkede antigen om antistofbindingssteder. Efterhånden som koncentrationen af umærket antigen stiger, binder mere af det til antistoffet og fortrænger den radiomærkede variant. Det reducerer således forholdet mellem antistofbundet radioaktivt mærket antigen og frit radiomærket antigen. Ved afslutningen af proceduren udskilles de bundne antigener. I sidste ende måles radioaktiviteten af frie antigener i den resterende supernatant ved hjælp af en gammatæller.
Hvad er ELISA?
ELISA er en immunoassayteknik, der detekterer antigen- og antistofkomplekser ved hjælp af enzymer. Det er et biokemisk analytisk assay først beskrevet af Engvall og Perlmann i 1971. I de fleste simple former for ELISA-teknikker er antigener fra patientprøven bundet til en fast overflade. Derefter påføres et matchende antistof over overfladen, så det kan binde sig til antigenet.
Figur 01: ELISA
Dette antistof er knyttet til et enzym. Senere fjernes eventuelle ubundne antistoffer ved vask med vaskemiddel. I det sidste trin af denne teknik tilsættes enzymets substrat. Hvis der er en korrekt binding af antigen og antistof, producerer den efterfølgende reaktion et detekterbart farvesignal, oftest en farveændring.
Hvad er lighederne mellem RIA og ELISA?
- RIA og ELISA er immunoassayteknikker.
- Begge teknikker besidder antigen- og antistofkompleksdannelse.
- Disse teknikker kan bruges til at detektere ukendte proteiner i prøver.
- De bruges begge til sygdomsdiagnostik i laboratorier.
- Begge er meget specifikke og følsomme teknikker.
Hvad er forskellen mellem RIA og ELISA?
RIA er en immunoassayteknik til påvisning af antigen-antistofkomplekset ved brug af radioisotoper. ELISA er en immunoassayteknik til påvisning af antigen-antistofkomplekset ved hjælp af enzymer. Så dette er den vigtigste forskel mellem RIA og ELISA. Desuden er antigenet i RIA-teknikken mærket, men i ELISA er antistoffet mærket. I RIA-teknikken er mærkningsmolekyler endvidere radioisotoper, mens mærkningsmolekyler i ELISA er enzymer. Dette er således endnu en forskel mellem RIA og ELISA.
Nedenstående infografik viser flere forskelle mellem RIA og ELISA i tabelform.
Opsummering – RIA vs ELISA
Immunoassays spiller en meget vigtig rolle i forskellige bioanalytiske omgivelser, såsom klinisk diagnostik, biofarmaceutisk analyse, miljøovervågning, biosikkerhed og fødevaretestning. Siden 1960'erne er der udviklet en bred vifte af immunoassays. RIA og ELISA er begge immunoassay-teknikker. RIA er en immunoassay-teknik til påvisning af antigen-antistofkompleks ved hjælp af radioisotoper. ELISA er en immunoassayteknik til påvisning af antigen-antistofkompleks ved hjælp af enzymer. Dette er således opsummeringen af forskellen mellem RIA og ELISA.
