Nøgleforskel – Direkte vs Indirekte ELISA
En enzym-linked immunoassay (ELISA), også kendt som enzym immunoassay, er en serologisk test, som påviser antistoffer i blodet. Det bruges som et diagnostisk værktøj til at finde ud af, om patienten har været udsat for en bestemt type virus eller et andet smittestof (antigen), og om kroppen har produceret antistoffer mod infektionen. ELISA kan også identificere tidligere og nuværende infektioner. Derfor bruges ELISA ofte som en præscreeningstest af lægerne forud for en dybdegående analyse af sygdomme. Denne test kan udføres i laboratoriet ved at tage en blodprøve fra patienten. Der er to typer ELISA-test: direkte ELISA og indirekte ELISA. Den vigtigste forskel mellem direkte og indirekte ELISA er, at indirekte ELISA er mere følsom og kræver tilføjelse af et sekundært antistof, mens direkte ELISA er mindre følsomt og kun bruger et primært antistof.
Hvad er Direct ELISA?
ELISA er en sygdomsdiagnostisk test udført for at identificere tilstedeværelsen af bestemte antigener eller antistoffer i blodet. Det udføres som et pladeassay. Det bruger antistoffer forbundet med let analyserede enzymer. Antigeners tilstedeværelse i serumprøven binder til specifikke antistoffer forbundet med enzymer. I det sidste trin tilsættes et specifikt substrat for at reagere med enzymet. Enzymet omdanner substratet til et farvet eller signalproducerende produkt. Farveændringen i det kemiske substrat afslører tilstedeværelsen af et bestemt antistof i serumprøven. Direkte ELISA-test bruger kun et primært antistof knyttet til enzymet. Ved binding til antigenet ændrer det hurtigt farven, hvilket indikerer tilstedeværelsen af det smitsomme stof i blodet. Imidlertid er intensiteten af signalerne svagere i direkte ELISA, da epitoperne er begrænset til binding af antigenerne. Derfor er direkte ELISA mindre følsom sammenlignet med indirekte ELISA.
Figur 01: Direkte ELISA-test
Hvad er indirekte ELISA?
ELISA kan udføres ved hjælp af to typer antistoffer, nemlig; primært antistof og sekundært antistof. Indirekte ELISA-værktøj bruger begge typer antistoffer til at forstærke signalerne for bedre påvisning. Indirekte ELISA-teknik udføres som følger.
- Plader inkuberes med antigener og vaskes for at blokere uspecifik binding.
- Derefter tilsættes primære antistoffer og vaskes.
- Enzymbundet sekundært antistof tilsættes og vaskes.
- Et substrat tilsættes og får lov til at reagere med enzymer.
- Signaler detekteres, og tilstedeværelsen eller fraværet af det specifikke antigen i prøven identificeres.
I indirekte ELISA-test kan flere sekundære antistoffer binde til et enkelt primært antistof. Sekundære antistoffer er forbundet med let analyserede enzymer. Derfor kan én binding give et stærkt signal på grund af mere end én interaktion. Derfor er indirekte ELISA mere følsom end direkte ELISA. Indirekte ELISA kan dog lave uspecifikke signaler på grund af krydsreaktioner af de sekundære antistoffer.
Figur 02: Indirekte ELISA-test
Hvad er forskellen mellem direkte og indirekte ELISA?
Direkte vs Indirekte ELISA |
|
| Direkte ELISA er mindre følsom sammenlignet med indirekte ELISA. | Indirekte ELISA er mere følsom. |
| Tid, | |
| Direct ELISA-test er en hurtig proces. | Indirekte ELISA er tidskrævende. |
| Brug af antistoffer | |
| Kun én type antistoffer (primære antistoffer) bruges i direkte ELISA. | Primære og sekundære antistoffer bruges til indirekte ELISA. |
| Link med enzymer | |
| Primære antistoffer er forbundet med enzymer. | Sekundære antistoffer er forbundet med enzymer. |
| Cross-Reactivity of Second Antibodies | |
| Direct ELISA eliminerer krydsreaktiviteten af andre antistoffer. | Indirekte ELISA er påvirket af krydsreaktivitet af andre antistoffer. |
| Signals | |
| Signalerne er svage sammenlignet med indirekte ELISA. | Signaler amplificeres i indirekte ELISA. Derfor er det nemt at opdage. |
Opsummering – Direkte vs Indirekte ELISA
ELISA er en biokemisk teknik, der hovedsageligt anvendes inden for immunologi til at påvise tilstedeværelsen af et antistof eller et antigen i en blodprøve fra en patient. Det kan udføres via to processer kendt som direkte eller indirekte ELISA. Direkte ELISA-test bruger kun primære antistoffer til at påvise antigenet, mens indirekte ELISA bruger både primære og sekundære antistoffer. I direkte ELISA mærkes primære antistoffer, mens sekundære antistoffer i indirekte ELISA mærkes. Dette er forskellen mellem direkte og indirekte ELISA.
