Nøgleforskellen mellem Klenow-fragment og DNA-polymerase 1 er, at Klenow-fragmentet er en stor del af DNA-polymerase 1, som mangler 5′ til 3′ exonukleaseaktivitet, mens DNA-polymerase er et enzym af E. coli, som har alle tre domæner inklusive 5′ til 3′ exonukleaseaktivitet.
DNA-polymerase er et af nøgleenzymer, der er involveret i DNA-replikation i levende organismer. Der findes forskellige former for DNA-polymeraseenzym i eukaryoter og prokaryoter baseret på størrelse og form. DNA-polymerase 1, 2 og 3 findes kun i prokaryote organismer, og de spiller forskellige roller i DNA-replikation. DNA-polymerase 1 har tre domæner med 5' til 3' polymerase, 3' til 5' exonukleaseaktivitet og 5' til 3' exonukleaseaktivitet. Klenow-fragmentet er et proteolytisk produkt af DNA-polymerase 1. Det har 5 til 3'-polymerase- og 3'- til 5'-exonukleaseaktiviteter af intakt DNA-polymerase 1, men det mangler 5'- til 3'-exonukleaseaktiviteten.
Hvad er Klenow Fragment?
Klenow-fragment er en stor del af DNA-polymerase 1. I modsætning til DNA-polymerase 1 ses 5' til 3' exonukleaseaktivitet ikke i Klenow-fragmentet, da det mangler det 5' til 3' fremadrettede exonukleasedomæne. Klenow-fragmenter fremstilles ved at fordøje DNA-polymerase 1 med en protease kaldet subtilisin, som er et protein-fordøjende enzym. I nogle anvendelser bliver 3' til 5' exonukleaseaktiviteten af Klenow-fragmentet uønsket. Det kan fjernes ved at indføre en mutation i genet, der koder for Klenow-fragmentet. Det resulterende enzym, som kun har 5'- til 3'-polymeraseaktiviteten, er kendt som exo-Klenow-fragmentet. Morfologisk ligner Klenow-fragmentet den menneskelige højre hånd. Det har N-termin alt 3'-5' exonukleasedomæne og det C-terminale polymerasedomæne adskilt af ca. 30 A.
Figur 01: Klenow-fragment og DNA-polymerase 1
Klenow-fragment er et vigtigt værktøj i molekylærbiologiske teknikker. Klenow-fragmenter har flere anvendelser. De er ekstremt vigtige ved stumpende kloning for at producere stumpe fragmenter. Klenow-fragmenter kan fjerne 3′ udhæng eller fylde 5′ udhæng for at danne stumpe ender. Desuden bruges Klenow-fragmenter til at syntetisere dobbeltstrenget DNA fra enkeltstrenge. Desuden bruges de til at fremstille radioaktivt mærkede prober under anvendelse af den 5' til 3' DNA-afhængige DNA-polymeraseaktivitet.
Hvad er DNA-polymerase 1?
DNA-polymerase 1 (Pol 1) er et enzym, der findes i prokaryoter, og som er nødvendigt for bakteriel DNA-replikation. Det er den første type DNA-polymerase opdaget af Arthur Kornberg i 1956. Pol 1 er den mest udbredte polymerase i E. coli. Det kodes af genet polA og består af 928 aminosyrer. Den består af tre domæner. Alle tre domæner opfylder forskellige funktioner. To domæner udfører 5' til 3' exonukleaseaktivitet og 3' til 5' exonukleaseaktivitet. På grund af denne aktivitet, som Pol 1 besidder, er det populært som et DNA-reparerende enzym snarere end et DNA-replikerende enzym. Tredje domæne har evnen til at katalysere flere polymerisationer (5′ til 3′) før frigivelsen af template-DNA'et og forbinde Okazaki-fragmenter sammen ved at fylde nyt DNA og fjerne RNA-primere.
Figur 02: DNA-polymerase
Pol 1 isoleret fra E Coli blev i vid udstrækning brugt i molekylære applikationer. Men når Taq Polymerase blev opdaget, erstattede den E Coli Pol 1 i PCR-teknologi. Taq-polymerase er en slags termostabil DNA-polymerase, der tilhører Pol 1.
Hvad er lighederne mellem Klenow Fragment og DNA-polymerase 1?
- Klenow-fragment er en stor del af DNA-polymerase 1.
- De har 5'til 3' DNA-afhængig DNA-polymeraseaktivitet og 3'til 5' exonukleaseaktivitet, der medierer korrekturlæsning.
- De bruges til flere formål.
Hvad er forskellen mellem Klenow Fragment og DNA-polymerase 1?
Nøgleforskellen mellem Klenow-fragment og DNA-polymerase 1 er, at Klenow-fragment mangler 5′ til 3′ exonukleaseaktivitet, mens DNA-polymerase 1 har 5′ til 3′ exonukleaseaktivitet. Derfor har Klenow-fragmentet to domæner, mens DNA-polymerase 1 har alle tre domæner.
Infografikken nedenfor viser flere detaljer om forskellen mellem Klenow-fragment og DNA-polymerase 1.
Oversigt – Klenow Fragment vs DNA Polymerase 1
DNA-polymerase 1 er et enzym af E. coli, som har tre domæner som 5' til 3' polymerisationsdomæne, 3' til 5' exonuklease domæne og 5' til 3' exonuclease domæne. Klenow-fragment er en stor del af DNA-polymerase. Det mangler ét domæne af DNA-polymerase 1, som er 5' til 3' exonuklease-domænet. Den vigtigste forskel mellem Klenow-fragment og DNA-polymerase 1 er, at Klenow-fragmenter ikke har 5′ til 3′ exonukleasedomæne, mens DNA-polymerase 1 har 5′ til 3′ exonukleasedomæne.
