Nøgleforskellen mellem T4 DNA-ligase og E. coli DNA-ligase er, at T4 DNA-ligase er et enzym, der er isoleret fra bakteriofag T4, mens E. coli DNA-ligase er et enzym, der er isoleret fra bakterien E. coli.
DNA-ligase er en specifik type enzym, der letter sammenføjningen af DNA-strenge gennem dannelsen af en phosphodiesterbinding. Det spiller en vigtig rolle ved at reparere enkeltstrengede brud og dobbeltstrengede brud i levende organismers DNA. Desuden bruges DNA-ligase til både DNA-reparation og DNA-replikation. Ud over de ovennævnte anvendelser har DNA-ligase også omfattende anvendelse i molekylærbiologiske eksperimenter såsom rekombinant DNA-teknologi. T4 DNA-ligase og E. coli DNA-ligase er to typer DNA-ligaseenzymer.
Hvad er T4 DNA-ligase?
T4-ligase er et DNA-forbindelsesenzym, der er isoleret fra bakteriofag T4. T4 bakteriofag er en virus, der inficerer Escherichia coli. T4-ligaseenzym er den mest almindeligt anvendte DNA-ligase i molekylærbiologisk laboratorieforskning. Norm alt katalyserer T4-ligase sammenføjningen af to sammenhængende eller stumpendede strenge af dobbeltstrenget DNA mellem 5'-phosphat- og 3'-hydroxylgrupperne i tilstødende nukleotider. Det kan også katalysere sammenføjningen af RNA til enten en DNA- eller RNA-streng i et duplex-molekyle. Dette enzym vil dog ikke forbinde enkeltstrengede nukleinsyrer. Desuden kan den også ligere stumpendet DNA med meget større effektivitet end E. coli DNA-ligase.
Figur 01: T4 DNA Ligase
Dette enzym kræver ATP som en cofaktor. Nogle genteknologiske forskningseksperimenter har allerede produceret flere aktive DNA-ligaseenzymer end vildtype T4 DNA-ligase. I en af tilgangene skabte de et fusionsenzymmolekyle ved at kæmme T4 DNA-ligase til enten p50- eller NF-kB-molekyle. Dette nye T4-ligaseenzym var 160 % mere aktivt i stumpende ligeringer til kloningsformål end vildtype T4 DNA-ligase. Desuden er den optimale temperatur for T4 DNA-ligase til at katalysere ligeringsreaktionen mere præcist 16 °C.
Hvad er E Coli DNA Ligase?
E. coli DNA-ligase er et enzym, der er isoleret fra E. coli-bakterier. Genet, der er ansvarligt for at lave E. coli DNA-ligase, er lig-genet. E. coli-DNA'et, ligase såvel som de fleste prokaryote DNA-ligaser, bruger energi, som opnås af NAD (nicotinamidadenin-dinukleotid) til at skabe phosphodiesterbindingen.
Figur 02: E. Coli DNA Ligase
E. coli DNA-ligase er et ligeringsenzym, der kan forbinde DNA-fragmenter ved at katalysere dannelsen af phosphodiesterbindinger mellem dobbeltstrengede DNA-fragmenter indeholdende 5'-phosphat-termini og 3'-hydroxyl-termini. Desuden ligerer det ikke stumpendet DNA undtagen under særlige forhold, såsom molekylær sammentrængning med polyethylenglycol. Det kan heller ikke forbinde RNA til DNA effektivt. Endvidere kan aktiviteten af E. coli DNA-ligase forstærkes ved tilstedeværelsen af DNA-polymerase 1 i den rigtige koncentration. Men når koncentrationen af DNA-polymerase 1-enzym er højere, har det negative virkninger på E. coli DNA-ligaseaktivitet.
Hvad er lighederne mellem T4 DNA Ligase og E Coli DNA Ligase?
- T4 DNA-ligase og E-coli DNA-ligase er to typer DNA-ligaseenzymer.
- Begge er proteiner opbygget af aminosyrer.
- Disse enzymer katalyserer dannelsen af en phosphodiesterbinding mellem sidestillet 5'-phosphat- og 3'-hydroxyltermini i duplex-DNA.
- De har omfattende anvendelser i molekylærbiologiske eksperimenter, såsom rekombinant DNA-teknologi.
Hvad er forskellen mellem T4 DNA Ligase og E Coli DNA Ligase?
T4 DNA-ligase er et enzym, der er isoleret fra bakteriofag T4, mens E. coli DNA-ligase er et enzym, der er isoleret fra E. coli-bakterier. Dette er således den vigtigste forskel mellem T4 DNA-ligase og E. coli DNA-ligase. Desuden er energikilden for T4 DNA-ligase ATP. På den anden side er energikilden for E. coli DNA-ligase NAD.
Nedenstående infografik viser forskellene mellem T4 DNA-ligase og E coli DNA-ligase i tabelform til sammenligning side om side.
Opsummering – T4 DNA Ligase vs E Coli DNA Ligase
T4 DNA-ligase og E. coli DNA-ligase er to enzymer, der katalyserer dannelsen af en phosphodiesterbinding mellem sidestillede 5'-phosphat- og 3'-hydroxyltermini i duplex-DNA. T4-ligase er et enzym, der er isoleret fra bakteriofag T4, mens E. coli DNA-ligase er et enzym, der er isoleret fra E. coli-bakterier. Så dette er den vigtigste forskel mellem T4 DNA-ligase og E coli DNA-ligase.
