Nøgleforskellen mellem isokratisk og gradienteluering er, at isokratisk eluering refererer til at opretholde en konstant koncentration i den mobile fase, hvorimod gradienteluering refererer til at opretholde en varierende koncentration i den mobile fase.
Begreberne isokratisk og gradienteluering bruges i kromatografi. Under en kromatografisk kørsel bruger vi en stationær fase, som er et ikke-bevægende stof, sammen med en mobil fase, det bevægelige stof. Den isokratiske og gradienteluering beskriver egenskaberne af den mobile fase.
Hvad er isokratisk eluering?
Isokratisk eluering er et udtryk, der bruges i kromatografi, når den mobile fase har en konstant koncentration. Her er koncentrationen af den mobile fase konstant gennem hele den kromatografiske proces. I denne proces kan vi observere topbredden stigende med retentionstiden lineært i kromatogrammet. Dette fører dog til en ulempe - de sent-eluerende toppe for sen eluering bliver meget flade og brede. Derfor bliver disse brede toppe svære at genkende som toppe.
Yderligere, i isokratisk eluering, ændres selektiviteten ikke i henhold til kolonnedimensionerne. Dette betyder, at selektiviteten ikke afhænger af ændringerne i søjledimensioner. Her betragtes længden og diameteren som søjledimensioner. Derfor eluerer toppene i samme rækkefølge.
Hvad er gradienteluering?
Gradienteluering er et begreb, der bruges i kromatografi, når her den mobile fase har en varierende koncentration. Med andre ord behøver koncentrationen af den mobile fase ikke at forblive konstant. I HPLC bruger en almindelig separationsmetode f.eks. methanol 10% i starten og slutter ved 90%, ved at øge koncentrationen gradvist. Den mobile fase har to komponenter: et svagt opløsningsmiddel og et stærkt opløsningsmiddel. Svagt opløsningsmiddel tillader det opløste stof at eluere langsomt, mens stærkt opløsningsmiddel forårsager den hurtige eluering af det opløste stof. I omvendt fasekromatografi bruger vi vand som det svage opløsningsmiddel og organisk opløsningsmiddel som det stærke opløsningsmiddel.
Figur 01: HPLC
Desuden reducerer gradientelueringsmetoden de senere eluerende komponenter for at få dem til at eluere hurtigere, hvilket giver en smal top i kromatogrammet. Denne metode forbedrer også topformen og tophøjden. I gradientelueringsteknik ændres elueringsrækkefølgen desuden med ændringerne i søjledimensioner.
Hvad er forskellen mellem isokratisk og gradienteluering?
Begreberne isokratisk og gradienteluering bruges i kromatografi. Isokratisk og gradienteluering beskriver egenskaberne af den mobile fase. Den vigtigste forskel mellem isokratisk og gradienteluering er, at isokratisk eluering refererer til opretholdelsen af en konstant koncentration i den mobile fase, hvorimod gradienteluering refererer til opretholdelsen af en varierende koncentration i den mobile fase.
I den isokratiske elueringsteknik øges spidsbredden lineært med retentionstiden. I gradientelueringsteknikken er retentionen af de senere eluerende komponenter dog nedsat, således at elueringen bliver hurtigere og giver smalle toppe. Bortset fra det afhænger selektiviteten i den isokratiske eluering ikke af søjledimensionerne, men i gradienteluering ændres selektiviteten med skiftende søjledimensioner.
Den følgende tabel opsummerer forskellen mellem isokratisk og gradienteluering.
Opsummering – Isokratisk vs gradienteluering
Isokratisk eluering og gradienteluering beskriver egenskaberne af den mobile fase. Den vigtigste forskel mellem isokratisk og gradienteluering er, at isokratisk eluering refererer til opretholdelsen af en konstant koncentration i den mobile fase, hvorimod gradienteluering refererer til opretholdelsen af en varierende koncentration i den mobile fase.
