Nøgleforskellen mellem det samlede celletal og det levedygtige celletal er, at det samlede celletal estimerer alle celler inklusive både levende og døde mikrobielle celler i en prøve, mens antallet af levedygtige celler kun estimerer de levende mikrobielle celler i en prøve.
Tælling af antallet af organismer i en population anses for nødvendigt for det meste eksperimentelt arbejde. Derfor forsøger vi at analysere antallet af mikrober i en prøve ved hjælp af direkte og indirekte metoder. Direkte målinger involverer metoder, der tæller celletal direkte. Indirekte målinger involverer måling af en eller anden parameter, der kan relateres til celleantal såsom celletæthed, tørvægt osv. Nogle metoder kvantificerer kun de levende mikrobielle celler i en prøve. Antallet af levedygtige celler er en sådan metode. Direkte mikroskopiske tællinger kvantificerer alle celler i et kendt volumen medium/prøve ved hjælp af et mikroskop. Derfor tæller den både levende og døde celler. Det er en type af et samlet celleantal.
Hvad er det samlede celleantal?
Tot alt celleantal er metoden, der involverer tælling af alle celler i et kendt volumen medium/prøve ved hjælp af et mikroskop og et tællekammer (hæmocytometer). I modsætning til levedygtige tællinger tælles både levende og døde celler. Derfor er dette en samlet optælling, medmindre der påføres en levedygtighedsfarvning under observationen. Ved mikroskopi observeres cellerne direkte under mikroskopet og tælles. Den bruger en cellesuspension, der består af mikrobielle celler. For at lette optællingen og nøjagtige målinger kan fortynding af prøven udføres. I meget høje/lave koncentrationer af celler er det en vanskelig opgave at opnå det samlede celletal ved hjælp af et mikroskop.
Figur 01: Tællekammer – hæmocytometer
Tællkamre er nemme, billige og hurtige til at tage et samlet celletal. Det vigtigste er, at tællekamre er nyttige til at tælle både eukaryoter og prokaryoter. Vi tæller celler i udvalgte kvadrater med kendt volumen for at kvantificere det samlede celleantal.
Hvad er antal levedygtige celler?
Antal levedygtige celler er en metode til at tælle levende mikrobielle celler i en prøve. Den tæller kun levende celler i prøven. Antallet af levedygtige plader, membranfiltrering og det mest sandsynlige antal er få teknikker til tælling af levedygtige celler. Disse tilgange er vækstbaserede. Levedygtig pladetællingsmetode er en kraftfuld metode, der bruges inden for mange mikrobiologiske områder, herunder fødevare- og mejerimikrobiologi, medicinsk mikrobiologi, miljømikrobiologi, mikrobiel genetik, vækstmedieudvikling og bioteknologi.
Den mest almindelige måde at tælle levedygtige bakterier på er at bruge en prøve, der er i stand til at danne kolonier på et agarmedium. Der er to hovedmåder at udføre en tallerkentælling på: spredepladeteknik og hældepladeteknik. Et kendt volumen prøve kan enten spredes på overfladen af en agarplade eller blandes ind i agaren. Pladen inkuberes derefter, og de opståede kolonier tælles. Antallet af kolonier er relateret til antallet af mikroorganismer i den oprindelige prøve. Levedygtige tællinger måler kun de celler, der er levende og vokser.
Figur 02: Antal levedygtige plader
Most probable number (MPN) er et alternativ til pladetællingsmetoder til at estimere populationstætheden af levedygtige celler. Den tæller organismer, der vokser i flydende kultur og er således en overvejende bakteriologisk teknik. Det er især nyttigt til lave koncentrationer af organismer, f.eks. mælk, drikkevand.
Membranfiltreringsteknik er mere velegnet, når mikrober er meget fortyndede som i en bys vandforsyning. Det gøres ganske enkelt ved at lede et kendt volumen af væsken gennem et filter og inkubere det på et næringsmedium. Kolonier, der udvikler sig på filteret, tælles, og bakterierne pr. milliliter af prøven beregnes.
Hvad er lighederne mellem det samlede celleantal og det levedygtige celleantal?
- Tot alt celletal og levedygtige celler er to typer mikrobielle teknikker, der kvantificerer celler.
- De er almindeligt anvendte opregningsteknikker i mikrobiologiske laboratorier.
Hvad er forskellen mellem det samlede celleantal og det levedygtige celleantal?
Tot alt celletal opregner alle levende og døde mikrobielle celler i en prøve. I modsætning hertil optæller antallet af levedygtige celler kun de levende celler i en prøve. Så dette er den vigtigste forskel mellem det samlede celletal og det levedygtige celleantal. Det samlede celletal er uafhængigt af væksten af kolonier på agarplader, mens antallet af levedygtige celler er en vækstbaseret teknik, og det afhænger af væksten af mikrobielle kolonier på agarplader.
Nedenstående infografik opsummerer forskellen mellem det samlede celleantal og det levedygtige celleantal.
Opsummering – Samlet celleantal vs. levedygtige celleantal
Tot alt celletal optæller både levende og døde mikrobielle celler, mens levedygtigt celletal kun opregner de levende celler. Dette er således den vigtigste forskel mellem det samlede celletal og det levedygtige celleantal. Desuden er antallet af levedygtige celler en vækstbaseret teknik, i modsætning til det samlede celletal. Desuden kræver det inkubation af plader, indtil man får de synlige kolonier. Levedygtige pladetælling, MPN og membranfiltrering er få teknikker til tælling af levedygtige celler, mens direkte mikroskopi og brugen af hæmocytometer er to teknikker til tot alt celletal.
