Nøgleforskel – Flowcytometri vs FACS
I sammenhæng med celleteori er celler den grundlæggende strukturelle og funktionelle enhed af alle levende organismer. Cellesortering er en metode, der bruges til at adskille forskellige celler i henhold til de fysiologiske og morfologiske træk. De kan have intracellulære eller ekstracellulære karakteristika. Interaktion mellem DNA, RNA og proteiner betragtes som intracellulære interaktive egenskaber, mens formen, størrelsen og forskellige overfladeproteiner betragtes som ekstracellulære egenskaber. I moderne videnskab har cellesorteringsmetoder ført til at hjælpe forskellige undersøgelser i biologiske undersøgelser og også i etableringen af nye principper gennem forskning i medicin. Cellesortering udføres på forskellige metoder, som omfatter både primitive med mindre udstyr og avancerede teknologiske metoder med brug af sofistikeret maskineri. Flowcytometri, fluorescerende aktiveret cellesortering (FACS), magnetisk celleselektion og enkeltcellesortering er de vigtigste anvendte metoder. Flowcytometri og FACS er udviklet til at differentiere celler i henhold til deres optiske egenskaber. FACS er en specialiseret type flowcytometri. Flowcytometri er en metode, der anvendes under analyse af en heterogen population af celler i henhold til forskellige celleoverflademolekyler, størrelse og volumen, som tillader undersøgelse af enkelte celler. FACS er en proces, hvorved en prøveblanding af celler sorteres efter deres lysspredning og fluorescensegenskaber i to eller flere beholdere. Dette er den vigtigste forskel mellem flowcytometri og FACS.
Hvad er flowcytometri?
Flowcytometri er en metode, som bruges til at undersøge og bestemme ekspressionen af intracellulære molekyler og celleoverfladen og til at definere og karakterisere forskellige celletyper. Det bruges også til at bestemme cellevolumen og cellestørrelse og til at evaluere renheden af subpopulationer, som er isoleret. Dette muliggør evaluering af flere parametre af enkelte celler på omtrent samme tid. Flowcytometri bruges til at måle intensiteten af fluorescens, som produceres på grund af fluorescensmærkede antistoffer, som hjælper med at identificere proteiner eller ligander, der binder til associerede celler.
Figur 01: Flowcytometri
Generelt omfatter flowcytometri primært tre undersystemer. De er fluidikken, elektronikken og optikken. I flowcytometri er fem hovedkomponenter tilgængelige, som bruges til cellesortering. De er en flowcelle (en strøm af væske, der bruges til at transportere dem og justere cellerne til optisk sensingproces), et målesystem (kan være af forskellige systemer, herunder kviksølv- og xenonlamper, højeffekt vandkølede eller laveffekt luftkølede lasere eller diodelasere), en ADC; Analog til Digital Converter system, forstærkningssystem og en computer til analyse. Indsamlingen er den proces, hvorved dataene indsamles fra prøverne ved hjælp af flowcytometer. Denne proces formidles af en computer, som er forbundet med flowcytometeret. Softwaren, der findes i computeren, analyserer den information, der tilføres computeren fra flowcytometeret. Softwaren har også evnen til at justere parametre for eksperimentet, der kontrollerer flowcytometeret.
Hvad er FACS?
I forbindelse med flowcytometri er fluorescensaktiveret cellesortering (FACS) en metode, som bruges til at differentiere og sortere en prøve af en blanding af biologiske celler. Cellerne er adskilt fra to eller flere beholdere. Sorteringsmetoden er baseret på cellens fysiske egenskaber, som omfatter lysspredning og fluorescensegenskaber for cellen. Dette er en vigtig videnskabelig teknik, som kan bruges til at opnå pålidelige kvantitative og kvalitative resultater af fluorescenssignaler, der udsendes fra hver celle. Under FACS indledningsvis den præ-opnåede blanding af celler; en suspension er rettet mod midten af en smal strøm af væske, som strømmer hurtigt. Væskestrømmen er designet til at adskille cellerne i suspensionen baseret på diameteren af hver celle. En vibrationsmekanisme påføres suspensionsstrømmen, hvilket resulterer i dannelsen af individuelle dråber.
Figur 02: FACS
Systemet er kalibreret for at skabe en enkelt dråbe med én celle. Lige før dannelsen af dråber bevæger flowsuspensionen sig langs et fluorescensmåleapparat, som detekterer fluorescenskarakteristikken for hver celle. Ved dannelsen af dråber placeres en elektrisk opladningsring, som induceres en ladning til ringen forud for måling af intensiteten af fluorescens. Når først dråberne er dannet fra suspensionsstrømmen, fanges en ladning i dråberne, som derefter går ind i et elektrostatisk afbøjningssystem. Ifølge sigtelsen omdirigerer systemet dråberne til forskellige beholdere. Metoden til påføring af afgiften varierer afhængigt af forskellige systemer, der anvendes i FACS. Udstyret, der bruges i FACS, er kendt som en fluorescensaktiveret cellesortering.
Hvad er ligheden mellem flowcytometri og FACS?
Flowcytometri og FACS er udviklet til at differentiere celler i henhold til deres optiske egenskaber
Hvad er forskellen mellem flowcytometri og FACS?
Flowcytometri vs FACS |
|
| Flowcytometri er en metode, der bruges under analyse af en heterogen population af celler i henhold til forskellige celleoverflademolekyler, størrelse og volumen, som tillader undersøgelse af enkeltceller. | FACS er en proces, hvorved en prøveblanding af celler sorteres efter deres lyssprednings- og fluorescensegenskaber i to eller flere beholdere. |
Opsummering – Flowcytometri vs FACS
Cellen er den grundlæggende strukturelle og funktionelle enhed af alle levende organismer. Cellesortering er den proces, hvorved celler isoleres og differentieres i forskellige kategorier baseret på deres intracellulære og ekstracellulære egenskaber. Flowcytometri og FACS er to vigtige metoder til cellesortering. Begge processer er udviklet til at differentiere celler i henhold til deres optiske egenskaber. Flowcytometri er en metode, der anvendes under analyse af en heterogen population af celler i henhold til forskellige celleoverflademolekyler, størrelse og volumen, som tillader undersøgelse af enkelte celler. FACS er en proces, hvorved en prøveblanding af celler sorteres efter deres lysspredning og fluorescensegenskaber i to eller flere beholdere. Dette er forskellen mellem flowcytometri og FACS.
Download PDF-versionen af flowcytometri vs FACS
Du kan downloade PDF-versionen af denne artikel og bruge den til offline-formål i henhold til citatnotat. Download venligst PDF-version her Forskel mellem flowcytometri og FACS
