Nøgleforskellen mellem GFP og EGFP er, at GFP er et vildtypeprotein, der er inkorporeret i den molekylære kloning af ikke-pattedyrsceller, mens EGFP er en forbedret eller konstrueret type GFP, der kan bruges på pattedyrsceller.
Molekylær kloning er en avanceret teknik, som videnskabsmænd bruger enormt til at udtrykke proteiner via rekombinant teknologi. I rekombinant DNA-teknologi er det nødvendigt at transformere rekombinant vektor med succes til værtsorganisme. Under transformationsprocessen bør det derfor identificeres og bekræftes, om genet af interesse er blevet transformeret eller ej til værten. For at vurdere dette anvender molekylærbiologer flere teknikker. Ud af disse teknikker er den ene reportergen. Disse reportergener fungerer som selekterbare markører for at vælge de korrekte transformanter. Green Fluorescent Protein (GFP) og Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) er således to reporterproteiner, der bruges til molekylær kloning.
Hvad er GFP?
GFP er et vildtype-protein, der indeholder 238 aminosyrerester og flere selekterbare regioner af aminosyresekvenser, der adskiller det fra de andre fluorescerende proteiner. Ydermere var dette vildtypeprotein oprindeligt isoleret fra Aequorea Victoria; en type vandmænd. Men i naturlige fænomener var vandmændene i stand til at producere grøn farvefluorescens som reaktion på visse stimuli.
Tidligere overraskede dette koncept forskerne, og de besluttede at bruge det på deres rekombinante DNA-teknologier. Som følge heraf brugte forskere denne mutante form af vildtypegenet som et reportergen i deres genekspressionsundersøgelser. Vildtype-genet af GFP er i stand til at producere et protein, som giver fluorescens ved stuetemperatur eller under UV-lys. Derfor, når det indsættes i transformanterne, udtrykker og producerer det fluorescens. Hvis fluorescensen er resultatet efter transformationsprocessen, bekræfter det transformationsprocessens succes. Med enkle ord signalerer fluorescensemission den vellykkede transformation af vektoren, der bærer genet af interesse ind i værten.
Figur 01: GFP
På grund af denne grund fungerer GFP som en in vivo-markør for genekspression. På nuværende tidspunkt er genteknologiske teknikker i brug til at producere GFP. Der er også mange forbedrede versioner af GFP, såsom EGFP, tilgængelige. Dette muliggør derfor effektiv brug af GFP i molekylær kloning og genekspressionsundersøgelser.
Hvad er EGFP?
Enhanced Green Fluorescent Protein eller EGFP er en forbedret version af GFP. Med enkle ord kan vi definere EGFP som en konstrueret version af vildtype GFP. Når vildtypegenet af GFP muterer, producerer det gavnlige virkninger. Derfor tillader det muterede gen af GFP ekspression af nye karakterer, og som et resultat af det kan vi producere Enhanced GFP med forbedrede egenskaber. Desuden kan vi introducere mutationer med succes i vildtype GFP-genet ved hjælp af bestråling eller kemiske metoder. Disse muterede gener producerer derefter EGFP, som har mere gavnlige egenskaber.
Figur 02: EGFP
De forbedrede egenskaber ved EGFP er som følger;
- Kan udsende stærkere fluorescenssignaler.
- Har høj følsomhed.
- Kan bruge det på pattedyrsceller i stedet for prokaryoter og andre eukaryoter på lavere niveau.
- Giver også øget renhed af produktet.
I sammenligning med GFP er EGFP derfor det foretrukne valg til genekspressionsundersøgelser. Produktet er dog dyrere i forhold til GFP.
Hvad er lighederne mellem GFP og EGFP?
- GFP og EGFP er to proteiner, som har evnen til at udsende grøn farve
- Derfor fungerer begge som reporterproteiner i genekspressionsundersøgelser.
- Det er også muligt at syntetisere begge ved hjælp af rekombinant DNA-teknologi.
- Desuden er det nemt at mutere disse to typer yderligere for at syntetisere forbedrede former.
Hvad er forskellen mellem GFP og EGFP?
Reportergenet er et gen, der binder til genet af interesse i rekombinant DNA-teknologi. Det signalerer den vellykkede transformation af den rekombinante vektor til værten. Her er GFP og EGFP to typer grønne fluorescerende proteiner, der fungerer som reporterproteiner. Den vigtigste forskel mellem GFP og EGFP er imidlertid, at GFP er en vildtype, mens EGFP er en konstrueret version af GFP. Desuden har EGFP mere gavnlige egenskaber end GFP. For eksempel producerer EGFP stærkere fluorescerende lys og er mere følsomt end GFP. En anden forskel mellem GFP og EGFP er de systemer, vi kan bruge disse i. Ikke-pattedyrsystemer bruger GFP, mens pattedyrsystemer bruger EGFP.
Nedenstående infografik viser forskellen mellem GFP og EGFP i tabelform.
Oversigt – GFP vs EGFP
GFP og EGFP er reporterproteiner i molekylær kloning og genekspressionsundersøgelser. GFP er vildtypeproteinet, som er et grønt fluorescerende protein. Proteinet var oprindeligt isoleret fra vandmændene Aequorea victoria. I modsætning hertil er EFGP en forbedret form for GFP-protein. Det er en mutant af vildtypen med forbedrede egenskaber. Derfor har EFGP den højere signalstyrke og højere følsomhed. Derfor kan vi bruge det på pattedyrvektorer. I modsætning hertil er brugen af GFP hovedsageligt kun på ikke-pattedyrsvektorer. Alt i alt er dette forskellen mellem GFP og EGFP.
