Nøgleforskel – HPLC vs HPTLC
Nøgleforskellen mellem HPLC og HPTLC er, at HPLC tillader kvantitativ adskillelse af komponenter i en prøve, hvorimod HPTLC ikke tillader kvantitativ adskillelse af komponenter i en prøve.
Kromatografi er en fysisk separationsmetode, der bruges til at adskille og identificere komponenterne i en blanding. Både HPLC og HPTLC er kromatografiske teknikker. HPLC er højtydende væskekromatografi. HPTLC er højtydende tyndtlagskromatografi.
Hvad er HPLC?
HPLC er højtydende væskekromatografi. Det er en analytisk teknik, der bruges til at adskille, identificere og kvantificere komponenter i en blanding. I denne teknik opløses prøven i et passende opløsningsmiddel. Derefter ledes opløsningsmidlet med prøven gennem en pumpe med et givet tryk. Pumpen er fyldt med fast adsorberende materiale. Så binder nogle komponenter sig stærkt til det absorberende materiale, mens andre komponenter binder løst. Dette får komponenterne til at have forskellige flowhastigheder gennem pumpen. Derfor kan komponenterne let adskilles.
Figur 01: Et HPLC-system
Det adsorberende materiale, der fylder pumpen, er kendt som den stationære fase. Opløsningsmidlet med den opløste prøve er kendt som den mobile fase. Pumpen, der bruges i denne teknik, kaldes kolonnen. Søjlen er fyldt med et adsorberende materiale, oftest silicapartikler. Størrelsen af disse partikler kan variere fra 2-50 μm. Separationsprocessen påvirkes af sammensætningen af den mobile fase og systemets temperatur. Interaktionerne mellem den stationære fase og komponenten i prøven kan være hydrofobe interaktioner, dipol-dipol-interaktioner, ionbinding osv.
Driftstrykket for HPLC er betydeligt højere end ved traditionel væskekromatografi. Den ligger omkring 50-350 bar. Forskellen mellem væskekromatografi og HPLC er, at i væskekromatografi falder prøven gennem søjlen under tyngdekraften, mens prøven i HPLC sættes under tryk gennem søjlen. Størrelsen af søjlen og de absorberende partikler er også meget små sammenlignet med den traditionelle væskekromatografi. Opløsningen givet af HPLC-teknikken er imidlertid overlegen.
Hvad er HPTLC?
HPTLC er højtydende tyndtlagskromatografi. Det er den avancerede og automatiserede form for traditionel TLC. Denne teknik giver en effektiv opløsning på kort tid. I denne analysemetode kan prøven og en reference analyseres på samme tid, hvilket gør det muligt at sammenligne prøven med referencen. Det giver en forbedret analytisk nøjagtighed end andre kromatografiske teknikker. Det tager kortere tid at analysere. Teknikken er en billig teknik.
Figur 02: En analyse af fødevarefarvestoffer ved hjælp af HPTLC
HPTLC-metoden er en simpel proces, og prøveforberedelsestrinnet er også elimineret (I traditionel TLC er prøveforberedelsestrinnet inkluderet før adskillelsen. Dette trin involverer rensning og berigelse). Opløsningsmidlet kan anvendes direkte uden nogen form for forbehandling, selvom andre kromatografiske teknikker kræver forbehandlinger såsom afgasning, filtrering osv.
Det adsorberende materiale, der anvendes i HPTLC, er silica med meget små partikelstørrelser. I traditionel TLC er partikelstørrelsen af silica 5-20 μm, mens den i HPTLC er 4-8 μm. Prøven påføres HPTLC-pladen ved hjælp af en applikator. Det giver en ensartet og sikker påføring. Derefter anbringes pladerne i et kammer med den mobile fase. Kammeret skal være mættet med dampen fra den mobile fase. Efter HPTLC-processen kan de pletter, der har flyttet sig, detekteres. Når pletterne på pladen detekteres, bruger HPTLC-teknikken et passende UV-område eller et jodkammer.
Hvad er forskellen mellem HPLC og HPTLC?
HPLC vs. HPTLC |
|
| HPLC er højtydende væskekromatografi. | HPTLC er højtydende tyndtlagskromatografi. |
| Teknik | |
| I HPLC ledes den mobile fase med opløsningsmidlet gennem en søjle fyldt med den stationære fase. | I HPTLC spottes prøven på en TLC-plade og placeres inde i et kammer, der indeholder den mobile fase; derefter får prøven lov til at migrere opad pladen sammen med den mobile fase. |
| Measurement | |
| I HPLC bruges forskellene mellem strømningshastigheder af komponenter gennem kolonnen til at adskille komponenterne i prøven. | I HPTLC bruges forskellene mellem afstande tilbagelagt af hver komponent i prøven til at adskille komponenterne i prøven. |
| Kvantitativ adskillelse | |
| HPLC tillader kvantitativ adskillelse af komponenter i en prøve. | HPTLC tillader ikke kvantitativ adskillelse af komponenter i en prøve. |
Oversigt – HPLC vs HPTLC
HPLC og HPTLC er to kromatografiske teknikker. Den vigtigste forskel mellem HPLC og HPTLC er, at HPLC tillader kvantitativ adskillelse af komponenter i en prøve, hvorimod HPTLC ikke tillader kvantitativ adskillelse af komponenter i en prøve.
