Nøgleforskellen mellem RP HPLC og HIC er, at RP HPLC bruger en mere polær mobil fase og en mindre polær stationær fase. Hvorimod HIC bruger en hydrofob stationær fase, der tillader de hydrofobe molekyler at binde sig til den.
Kromatografi er en analytisk teknik, der hjælper med at adskille en blanding i dens komponenter. Først skal vi opløse prøven, der skal adskilles i en opløsning. Denne opløsning-stof-blanding kaldes den mobile fase. Derefter føres den mobile fase gennem et andet materiale kaldet den stationære fase. Den stationære fase bestemmer adskillelsen af komponenterne. Adskillelsen sker på grund af opdelingen af materiale mellem den mobile fase og den stationære fase.
Hvad er RP HPLC?
Udtrykket RP HPLC står for Reverse Phase High-Performance Liquid Chromatography. Det involverer adskillelse af komponenter i en blanding, i henhold til hydrofobicitet. De hydrofobe komponenter i den mobile fase forbindes med de immobiliserede hydrofobe ligander på den stationære fase, mens hydrofile komponenter eluerer gennem den stationære fase uden at blive knyttet til overfladen af den stationære fase.
Figur 01: HPLC-apparat
Denne metode har desuden større reproducerbarhed sammenlignet med andre kromatografiske teknikker, og den viser også bred anvendelighed. Derfor bruger vi denne metode i laboratorier til over 75% af alle HPLC-metoder. Det meste af tiden bruger vi en vandig blanding af vand med et blandbart polært organisk opløsningsmiddel som den mobile fase. Det vil således sikre vedhæftningen af de hydrofobe komponenter i opløsningen til overfladen af den stationære fase.
Hvad er HIC?
Udtrykket HIC står for Hydrophobic Interaction Chromatography. Det er en type omvendt fase HPLC, og denne metode bruges hovedsageligt til adskillelse af store biomolekyler såsom proteiner. I denne metode skal vi bruge et vandigt medium til at lave prøven af biomolekylet. Det skyldes, at organiske opløsningsmidler kan forårsage denaturering af proteinerne. Desuden bruger denne teknik interaktionen mellem store molekyler med en let hydrofob overflade af den stationære fase. Desuden er vi nødt til at bruge en høj s altkoncentration i prøven, fordi det tilskynder proteinet til at blive tilbageholdt på pakningen; denne proces kaldes uds altning. Ved at mindske s altkoncentrationen gradvist kan vi få biomolekylerne til at eluere separat i henhold til deres hydrofobicitet.
Norm alt bruger denne metode betingelserne modsat ionbytterkromatografi. I denne teknik skal vi først føre en bufferopløsning gennem kolonnen for at reducere opløsningen af opløst stof i prøven. Det får de hydrofobe områder af proteinet til at udsætte. Men når molekylet er mere hydrofobt, kræves der mindre s alt for at fremme bindingen. Her elueres de mindre hydrofobe opløste stoffer først, og ifølge ændringen i s altkoncentrationen elueres flere hydrofobe opløste stoffer sidst.
Hvad er forskellen mellem RP HPLC og HIC?
Kromatografi er en analytisk teknik til adskillelse af komponenter i en blanding. RP HPLC og HIC er to specialiserede kromatografiske teknikker. Den vigtigste forskel mellem RP HPLC og HIC er, at RP HPLC bruger en mere polær mobil fase og mindre polær stationær fase, hvorimod HIC bruger en hydrofob stationær fase, som gør det muligt for de hydrofobe molekyler at binde sig til den.
Nedenstående infografik opsummerer forskellen mellem RP HPLC og HIC.
Oversigt – RP HPLC vs. HIC
Kromatografi er en analytisk teknik til adskillelse af komponenter i en blanding. RP HPLC og HIC er to specialiserede kromatografiske teknikker. Den vigtigste forskel mellem RP HPLC og HIC er, at RP HPLC bruger en mere polær mobil fase og en mindre polær stationær fase, hvorimod HIC bruger en hydrofob stationær fase, som gør det muligt for de hydrofobe molekyler at binde sig til den.
