Nøgleforskellen FPLC og HPLC er, at FPLC er en type væskekromatografi, som oprenser store biomolekyler såsom proteiner, nukleotider og peptider, mens HPLC er en type væskekromatografi, der adskiller forbindelser med lille molekylvægt.
Væskekromatografi er en teknik, der bruges til at adskille en prøve i dens individuelle komponenter. Denne adskillelse opstår på grund af interaktionen af specifikke prøver med mobile og stationære faser. Komponenter i en prøve adskilles baseret på hver komponents affinitet for den mobile fase i væskekromatografi. Når den mobile fase og prøven passerer gennem en søjle, begynder prøvens komponenter at adskilles i bånd, der kan påvises ved UV-VIS-spektroskopi. Derfor er FPLC og HPLC to typer væskekromatografiteknikker.
Hvad er FPLC?
FPLC er en type væskekromatografi, der oprenser store biomolekyler såsom proteiner, nukleotider og peptider. Den hurtige proteinvæskekromatografi (FPLC) blev først udviklet og markedsført i Sverige af selskabet Pharmacia i 1982. Det bruges ofte til at analysere eller oprense proteinblandinger. Dette finder sted baseret på princippet om prøvekomponenters affinitet for bevægende væske (mobil fase) og et porøst fast materiale (stationær fase). I FPLC er den mobile fase en buffer, og den stationære fase er en harpiks sammensat af perler. Den består norm alt af tværbundet agarose pakket ind i en cylindrisk glas- eller plastiksøjle.
Figur 01: FLPC-apparat (Fast Protein Liquid Chromatography)
I det meste af FLPC-strategien bruges ionbytterharpiks. Derfor vil proteinet af interesse binde til harpiksen ved en ladningsinteraktion. FLPC-teknikken bruger også to buffere: buffer 1 (løbsbufferen) og buffer 2 (elueringsbufferen). Til at begynde med, når buffer og prøveblanding køres gennem søjlen, vil proteinet af interesse i blandingen binde til harpiksen ved en ladningsinteraktion. Men proteinet af interesse bliver dissocieret og vender tilbage til opløsningen i elueringsbuffer, når elueringsbufferen løber gennem søjlen ved afslutningen af processen. Senere passerer opløsningen (elueringsmiddel, der indeholder protein af interesse) gennem to detektorer, som måler s altkoncentration og proteinkoncentration. Efterhånden som hvert protein elueres, fremstår det som en "top" under detektionen og kan opsamles til videre brug.
Hvad er HPLC?
HPLC er en type væskekromatografi, som adskiller forbindelser med lille molekylvægt. I 1969 blev den første HPLC kommercielt fremstillet af Waters Corporation, USA. Ved højtydende væskekromatografi (HPLC) pumpes en prøveblanding (analyt) i et opløsningsmiddel (mobil fase) gennem en søjle med kromatografisk pakkemateriale (stationær fase) ved højt tryk. Prøveblandingen bæres af en bevægende bæregasstrøm af helium eller nitrogen.
Figur 02: HPLC (High-Performance Liquid Chromatography)
De komponenter i prøveblandingen, der har den mindste mængde interaktion med den stationære fase eller mest interaktion med den mobile fase, vil forlade kolonnen hurtigere. På den anden side vil komponenterne i prøveblandingen, som har den største mængde interaktion med den stationære fase eller den mindste mængde interaktion med den mobile fase, forlade søjlen langsommere. Baseret på ovenstående interaktionsprincip kan komponenterne i prøveblandingen adskilles. Desuden identificerer instrumentdetektoren hver komponent i prøveblandingen, der forlader kolonnen. HPLC bruges til at inspicere miljømæssige og biologiske prøver for tilstedeværelse eller fravær af kendte forbindelser, såsom lægemidler, toksiner eller pesticider. Det bruges i forskellige industrier som f.eks. medicin, miljø, retsmedicin og kemikalier.
Hvad er lighederne mellem FPLC og HPLC?
- FPLC og HPLC er typer væskekromatografi.
- Begge bruges til at adskille og identificere biologiske prøver.
- De har en flydende mobil fase og en fast stationær fase.
- Begge teknikker bruger en kolonne til at passere gennem prøven.
- Disse teknikker bruger pumper, detektorer, ventiler og software til prøveseparering og detektion.
Hvad er forskellen mellem FPLC og HPLC?
FPLC er en type væskekromatografi, der bruges til at oprense store biomolekyler såsom proteiner, nukleotider og peptider. HPLC er en type væskekromatografi, der bruges til at adskille forbindelser med lille molekylvægt. Så dette er den vigtigste forskel mellem FPLC og HPLC. Desuden bruger FPLC pH- og ledningsevnemonitorer samt fraktionssamlere. I modsætning hertil bruger HPLC ikke pH- og ledningsevnemonitorer og fraktionssamlere.
Infografikken nedenfor viser flere forskelle mellem FPLC og HPLC i tabelform.
Oversigt – FPLC vs HPLC
Kromatografi er en laboratorieanalyseteknik, der bruges til adskillelse af komponenter fra en blanding. Det er opdelt i flere typer såsom søjlekromatografi, gaskromatografi, væskekromatografi, ionbytningskromatografi osv. FPLC og HPLC er to typer væskekromatografiteknikker. FPLC er en type væskekromatografi, der bruges til at oprense store biomolekyler såsom proteiner, nukleotider og peptider. På den anden side er HPLC en type væskekromatografi, der bruges til at adskille forbindelser med lille molekylvægt. Dette er således opsummeringen af, hvad der er forskellen mellem FPLC og HPLC.
