Nøgleforskellen mellem omvendt fase og normal fase HPLC er, at den omvendte fase HPLC bruger en ikke-polær stationær fase og en polær mobil fase, mens normal fase HPLC bruger en polær stationær fase og en mindre polær mobil fase.
Den normalfase-HPLC er den ældste HPLC-teknik, som Tswett brugte i sin separation af planteekstrakter; han brugte kridt i en glassøjle. Dette var den klassiske kromatografimetode, der førte til at navngive den som den "normale" teknik. Omvendt fase-HPLC er på den anden side det modsatte af den normale teknik, som videnskabsmænd har udviklet for nylig.
Hvad er omvendt fase-HPLC?
Omvendt fase HPLC er en kromatografisk teknik, hvor vi bruger en hydrofob stationær fase. Blandt alle HPLC-metoder bruger vi denne metode til cirka 70 % på grund af dens brede anvendelighed og reproducerbarhed. Den stationære fase er upolær, og den mobile fase er polær.
De fleste gange bruger videnskabsmænd en vandig blanding af vand med et blandbart, polært organisk opløsningsmiddel, såsom acetonitril eller methanol, som den mobile fase. Derfor interagerer analytterne med den ikke-polære stationære fase.
Hvad er normalfase-HPLC?
HPLC i normal fase er en kromatografisk teknik, hvor vi bruger en hydrofil stationær fase. Det er den traditionelle metode til HPLC, selvom vi ikke bruger den så meget. Den stationære fase er polær, og den mobile fase er upolær. Endnu vigtigere er den mobile fase af denne teknik 100% organisk. Det betyder, at der ikke bruges vand til dette.
Figur 01: En prøveprofil for normalfase- og omvendtfase-HPLC-kromatogrammer i henhold til polariteten af komponenterne i analytten.
Den stationære fase indeholder typisk silica, cyano, diol, aminobundne faser osv. Mobile faser omfatter organiske opløsningsmidler såsom hexan, ethylacetat osv. Denne teknik er baseret på tilbageholdelse af opløsningsmiddel- eller analytmolekyler på polær stationær fase.
Hvad er forskellen mellem omvendt fase og normal fase HPLC?
Omvendt fase HPLC er en kromatografisk teknik, hvor vi bruger en hydrofob stationær fase. Den stationære fase af denne teknik er upolær, mens den mobile fase er polær. Desuden bruger forskere en vandig blanding af vand med et blandbart, polært organisk opløsningsmiddel, såsom acetonitril eller methanol, som den mobile fase i omvendt fase HPLC. I modsætning hertil er normalfase-HPLC en kromatografisk teknik, hvor vi bruger en hydrofil stationær fase. Den stationære fase af denne teknik er polær, mens den mobile fase er upolær. Ud over det bruger forskere organiske opløsningsmidler såsom hexan, ethylacetat osv. som den mobile fase af normalfase-HPLC. Nedenstående infografik viser forskellen mellem omvendt fase og normal fase HPLC i tabelform.
Opsummering – omvendt fase vs normal fase HPLC
Omvendt fase og normal fase HPLC-teknikker er to væskekromatografiske teknikker. Den vigtigste forskel mellem omvendt fase og normal fase HPLC er, at den omvendte fase HPLC bruger en ikke-polær stationær fase og en polær mobil fase, mens normal fase HPLC bruger en polær stationær fase og en mindre polær mobil fase.
