Nøgleforskellen mellem HPLC og hurtig HPLC er, at pumpetrykket, som vi bruger til HPLC, er omkring 40 MPa, mens pumpetrykket til hurtig HPLC er omkring 3-5 MPa.
Den mest almindelige teknik, som vi bruger til at adskille komponenter i en blanding, er "væskekromatografi". Der er flere teknikker til at opnå dette formål, hvor HPLC er meget populær. HPLC står for High Performance Liquid Chromatography, der identificerer, kvantificerer og adskiller komponenter i en væskeblanding på en hurtig og effektiv måde. Hurtig HPLC er en speciel anvendelse af HPLC, som på det seneste har fanget opmærksomheden hos dem, der er involveret i undersøgelsen af løsninger.
Hvad er HPLC?
HPLC er højtydende væskekromatografi. Det gør brug af et højt tryk til at skubbe opløsningsmidler, så de passerer gennem en søjle. Det er også en ideel måde at adskille og studere forskellige forbindelser såsom aminosyrer, nukleinsyrer, kulhydrater, steroider, antibiotika og kulbrinter. HPLC har mange fordele i forhold til andre metoder til separation af blandinger, såsom højere opløsning og hurtigere analyse. Det udsletter behovet for ompakning og regenerering og giver bedre kontrol over parametre og øger dermed effektiviteten af separation. Ideelt set egner HPLC sig til store applikationer, da det kan adskille meget små partikler og tillader brugen af høje tryk, der gør det let for opløsningsmidler at flyde let.
Figur 01: HPLC-kolonne
Kort sagt er HPLC-teknikkens funktionsmåde som følger. Først bør vi indføre prøven i strømmen af mobil fase i diskrete små mængder ved hjælp af en pumpe. Pumpetrykket skal holdes på 40 MPa. Denne strøm af mobil fase perkolerer gennem HPLC-søjlen. Derefter passerer komponenterne i prøven også gennem søjlen. Imidlertid adskiller deres bevægelseshastigheder sig fra hinanden på grund af forskellen i interaktionerne mellem prøvekomponenterne og adsorbenten inde i søjlen. Vi kalder denne adsorbent som den stationære fase, fordi den ligger inde i søjlen (ikke bevæger sig). Derefter kan vi i slutningen af kolonnen opsamle prøven, der eluerer fra kolonnen, og derved kan vi opsamle komponenterne i prøven separat.
Hvad er hurtig HPLC?
For nylig udviklede forskere ved Schering Plough-forskningsinstituttet en hurtig HPLC-teknik, der er en avanceret version af HPLC, da den giver mulighed for endnu hurtigere adskillelse af forbindelser fra en blanding. Også kendt som hurtig HPLC, denne teknik gør brug af en 2,7 um smeltet kerne silica partikler, der er fremstillet ved at fusionere 0,5 um porøs silica over en fast silica partikel. Disse unikt fremstillede partikler gør separationsproceduren meget hurtig og det også ved lavt modtryk end hvad vi bruger i HPLC.
Figur 02: FPLC-apparat
Hurtig HPLC får resultater, der kan sammenlignes med UPLC, men videnskabsmænd mener, at denne teknik er overlegen, da den ikke kræver meget dyrt ultrahøjtryksudstyr. Det gode er, at hurtig HPLC ikke kræver nogen nye laboratorieprotokoller.
Hvad er forskellen mellem HPLC og hurtig HPLC?
HPLC er højtydende væskekromatografi og hurtig HPLC er en avanceret form for højtydende væskekromatografi. Den vigtigste forskel mellem HPLC og hurtig HPLC er, at pumpetrykket, som vi bruger til HPLC, er omkring 40 MPa. Hvorimod pumpetrykket for hurtig HPLC er omkring 3-5 MPa. Ydermere kan vi adskille forskellige forbindelser såsom aminosyrer, nukleinsyrer, kulhydrater, steroider, antibiotika og kulbrinter ved hjælp af HPLC teknikken, mens den hurtige HPLC teknik hovedsageligt bruges til adskillelse af proteiner.
Nedenstående infografik præsenterer flere oplysninger om forskellen mellem HPLC og hurtig HPLC.
Opsummering – HPLC vs Fast HPLC
HPLC er en væskekromatografiteknik, der er blevet meget populær over hele verden. Hurtig HPLC er en ny version af HPLC, forskere ved Schering Plough Institute udviklede denne nye teknik. Den vigtigste forskel mellem HPLC og hurtig HPLC ligger i pumpetrykket, som vi bruger til adskillelsen. Det er; pumpetrykket, som vi bruger til HPLC, er omkring 40 MPa. Men pumpetrykket til hurtig HPLC er omkring 3-5 MPa.
