Nøgleforskel – Gramfarvning vs Acid Fast
Bakterier er meget små mikroorganismer. De er gennemsigtige, og deres opdagelse er vanskelig under levende og ufarvede forhold. Der er således udviklet forskellige farvningsmetoder for at lette bakteriepåvisning. Der er tre hovedtyper af farvningsteknikker: simpel farvning, differentiel farvning og strukturel farvning. Differentiel farvning er en teknik, der bruger mere end én farvning til at differentiere bakterier. Gramplet og syrefast plet er mest populært kendt som differentialfarver. Gram-farvning er en differentiel farvningsteknik, som adskiller bakterier i to grupper kendt som Gram-positive bakterier og Gram-negative bakterier. Den syrefaste farve er en differentialfarvning, der bruges til at identificere syrefaste organismer såsom Mycobacterium fra ikke-syrefaste organismer. Dette er den vigtigste forskel mellem Gram-farve og Acid Fast-farve.
Hvad er Gram Stain?
Gramfarvning er en vigtig differentiel farvningsteknik, der bruges til bakteriel identifikation i mikrobiologi. Denne teknik blev introduceret af den danske bakteriolog Hans Christian Gram i 1884. Gramfarvning kategoriserer bakterier i to hovedgrupper kaldet grampositive og gramnegative, som er meget vigtige i bakterieklassificering og identifikation. Mikrobiologer udfører gram-farvning som et indledende trin i bakteriel karakterisering under deres studier.
Bakterier er grupperet baseret på forskellene i deres cellevæg. Gram-positive bakterier er sammensat af et tykt peptidoglycan-lag i deres cellevæg, mens gram-negative bakterier er sammensat af et tyndt peptidoglycan-lag i deres cellevæg. Resultatet af gram-farvningen vil være baseret på forskellen i tykkelsen af peptidoglycanlaget i cellevæggen.
Grams-farvning udføres ved hjælp af fire forskellige reagenser, nemlig; primær bejdse, bejdsemiddel, affarvningsmiddel og modbejdse. Krystalviolet og safranin bruges som henholdsvis primær- og modfarvning, mens gram jod og 95 % alkohol bruges som henholdsvis bejdsemiddel og affarvningsmiddel. De grundlæggende trin for gramfarvning er som følger;
- En bakterieudstrygning fremstilles på et rent objektglas, varmefikseres og afkøles.
- Udstrygning er oversvømmet med krystalviolet i 1 – 2 minutter.
- Udstrygning skylles med langsomt rindende postevand for at fjerne overskydende pletter.
- Gram jod påføres udstrygningen i 1 minut.
- Udstrygning skylles med langsomt rindende postevand
- Smear vaskes med 95 % alkohol i 2 – 5 sekunder og skylles med langsomt rindende postevand.
- Udstrygning er modfarvet med safranin i 1 minut
- Udstrygning skylles med langsomt rindende postevand, tørres og observeres under mikroskop.
I slutningen af gram-farven vil gram-negative bakterier blive observeret i pink farve, mens gram-positive bakterier vil blive observeret i lilla farve.
Figur 01: Gram-negative og Gram-positive bakterier
Resultatet af gram-farvningen bestemmes af tykkelsen af peptidoglycanlaget i deres cellevæg. Under affarvningstrinnet fjernes primær plet og bejdsemidlet let fra de gramnegative bakterier og bliver farveløse, da de har et tyndt peptidoglycanlag. Den primære plet bibeholdes i de gram-positive bakterier, da de har et tykt peptidoglycanlag. Modfarven vil ikke være effektiv for gram-positive bakterier på grund af tilbageholdelsen af den primære plet. Således vil grampositive bakterier være synlige i primær pletfarve, det vil sige lilla farve. Modpletten vil farve de gramnegative bakterier, og de vil være synlige i plukfarven, som er safraninfarven. Derfor er det let at kategorisere bakterier i to grupper efter gramfarvning, og det er værdifuldt til bakteriel differentiering og identifikation.
Hvad er syrefast?
Syreægthed er en fysisk egenskab hos visse bakterier, specielt deres modstandsdygtighed over for affarvning af syrer under farvningsprocedurer. Når de først er farvet, modstår disse organismer fortyndede syre- og/eller ethanolbaserede affarvningsprocedurer, der er almindelige i mange farvningsprotokoller. Således er navnet 'syrefast' givet til disse organismer. Denne egenskab er vist på grund af at have et højt niveau af voksagtigt materiale (mykolsyrer) i deres cellevægge. Denne test er afgørende for identifikation af Mycobacterium tuberculosis.
Figur 2: Syrefaste mykobakterier
Denne syrefaste plet blev udviklet af Paul Ehrlich i 1882. Ehrlichs syrefaste teknik blev modificeret af Ziehl-Neelsen, og den bruges nu hyppigere. Syrehurtig farvningsprocedure involverer tre forskellige reagenser. Carbol fuschin bruges som den primære farve. Syresprit bruges som affarvningsmiddel. Methylenblåt bruges som modfarvning. Farvningsproceduren udføres som følger.
- Den primære farvning (carbol fuchsin) påføres den fastgjorte prøve på objektglasset (Alle celler vil blive farvet i rød farve).
- Objektglasset opvarmes ved dampning i 5 minutter, hvilket driver pletterne ordentligt ind i cellerne.
- Derefter tilsættes affarvningsopløsningen (Dette fjerner det røde farvestof fra alle celler undtagen de syrefaste bakterier).
- Methylenblåt tilsættes som en modplet (den farver alle affarvede bakterieceller).
- Syrehurtige bakterier forbliver røde, mens ikke-syrefaste bakterier farves med blåt.
Hvad er lighederne mellem Gram-farve og Acid Fast?
- Gramfarvning og syrefast er to forskellige farvningsteknikker.
- Begge teknikker kategoriserer bakterier i to grupper.
- Begge teknikker bruger to pletter og en affarvning.
Hvad er forskellen mellem Gram-farvning og syrefast?
Gram Stain vs Acid Fast |
|
| Gram-farvning er en differentiel farvningsteknik, som adskiller bakterier i to grupper Gram-positive bakterier og Gram-negative bakterier. | Acid Fast stain er en differentialfarvning, der bruges til at identificere syrefaste organismer fra ikke-syrefaste organismer. |
| Primær plet | |
| Krystalviolet er den almindeligt anvendte primære farve ved gramfarvning. | Carbol fuchsin er den primære plet, der bruges til syrefast. |
| Affarvemiddel | |
| 95 % alkohol bruges som affarvningsmiddel i gram-farve. | Syr alkohol bruges som et affarvningsmiddel i syrefast. |
| Counter Stain | |
| Gram-plet bruger safranin som modplet. | Acid fast stain bruger methylenblåt som modfarvning. |
| Observation | |
| Gram-negative bakterier observeres i pick-farve, og gram-positive bakterier observeres i lilla farve. | Acid Fast-bakterier observeres i rød farve, og ikke-syrefaste bakterier observeres i blå farve. |
Opsummering – Gram-farvning vs. Acid Fast
Visualisering af mikroorganismer i levende tilstand er vanskelig. Derfor bruges biologiske pletter og farvningsprocedurer i vid udstrækning til at studere deres egenskaber. Differentiel farvning er en type farvningsteknik, der bruges til at differentiere bakterier. Gramfarvning og syrefast farvning er to forskellige farvningsteknikker. Gramfarvning adskiller gramnegative bakterier og grampositive bakterier baseret på tykkelsen af deres cellevægge. Syrehurtig farvning adskiller syrefaste bakterier fra ikke-syrefaste bakterier baseret på mycolsyreindholdet i cellevæggen. Dette er forskellen mellem syrefast og gramfarvning.
Download PDF-version af Gram Stain vs Acid Fast
Du kan downloade PDF-versionen af denne artikel og bruge den til offline-formål i henhold til citatnotat. Download venligst PDF-versionen her Forskel mellem Gram-farve og syrefast.
