Nøgleforskel – CFU vs MPN
Colony forming unit (CFU) og Most probable number (MPN) er to metoder, der bruges til at optælle mikroorganismer i prøver. Begge parametre bruges til at påvise vandkvalitet og fækale indikatorbakterier i vandprøver. Kolonidannende enhed er et mål, der bruges til at optælle antallet af levedygtige bakterieceller eller svampeceller i specifik volumen eller vægt af en given prøve. Standardenheden for denne parameter er CFU/ml eller CFU/g. Det mest sandsynlige antal er en anden enhed, der bruges til at måle antallet af levedygtige bakterieceller i en væskeprøve. Den vigtigste forskel mellem CFU og MPN er, at CFU beregnes ud fra bakterie- og svampekolonierne, der vokser på en fast agarplade, mens MPN beregnes ud fra levedygtige bakterier, der vokser i et flydende medium.
Hvad er CFU?
Colony forming unit (CFU) er en parameter, som måler antallet af levedygtige bakterie- eller svampeceller i en given prøve. Metoden, som tæller kolonidannende enheder, omtales som standardpladetælling. De levedygtige kolonier, der vises på agarpladerne, udtrykkes som CFU pr. 1 ml (kolonidannende enhed pr. milliliter) af prøven for væsker eller CFU pr. 1 g (kolonidannende enhed pr. gram) af prøven for faste stoffer.
Der er to almindelige metoder, der bruges til at måle CFU i en prøve. De er spredeplademetode og hældeplademetode. Disse to metoder understøttes af en teknik kaldet seriel fortynding. Serielt fortyndede prøver gør det muligt at opnå et tælleligt antal kolonier på agaroverfladen. Et kendt volumen prøve kan spredes på overfladen af en agarplade eller blandes med agar og hældes på en plade. Pladen inkuberes derefter, og de opståede kolonier tælles. Antallet af kolonier er relateret til antallet af mikroorganismer i den oprindelige prøve. De plader, der viser for mange kolonier eller for få kolonier, udelukkes fra optælling, fordi resultaterne muligvis ikke er statistisk nøjagtige på disse plader. Statistisk set er det bedste område 30 – 300 kolonier på en agarplade. Derfor bør de korrekte plader vælges for nøjagtig opregning. Seriel fortynding udføres for ovenstående funktion.
Når du tæller antallet af levedygtige kolonier på plader, kan CFU/ml beregnes ved hjælp af følgende ligning.
CFU pr. ml original prøve=antal kolonier på en plade X fortyndingsfaktor
Fortyndingsfaktor=(1/ Pladens fortynding)
For eksempel, hvis du får 149 kolonier på pladen med 10-4 fortyndingen, så kan antallet af bakterier i 1 ml af den originale prøve beregnes som følger:
CFU/ml=(149) x (1/10-4)
=149 × 104 eller 1490000
=1. 49 x 106
Figur 01: Kolonidannende enhed
Hvad er MPN?
Det mest sandsynlige tal er et alternativt mål til CFU/ml. MPN estimerer også de levedygtige celler i en væskeprøve. Det tæller organismer, der vokser i en flydende kultur og er en overvejende bakteriologisk teknik. Denne metode er især nyttig til prøver, der indeholder lave koncentrationer af bakterieceller; for eksempel mælk, drikkevand osv. MPN-værdi er udtrykt for 100 ml volumen. MPN er afhængig af en statistisk metode baseret på sandsynlighedsteori. Der er statistiske tabeller designet til at finde MPN-værdier pr. 100 ml af prøven. Disse tabeller viser resultaterne ved 95 % konfidensgrænser.
MPN-værdien beregnes efter udførelse af en teknik kaldet multiple tube-fermenteringsmetode. Tre sæt rør indeholdende et passende dyrkningsmedium inokuleres med tre forskellige volumener af prøven, såsom 10 ml, 1 ml og 0.1 ml og inkuberes til vækst. Efter inkubationsperioden bedømmes rørene + (positive) eller – (negative) for tilstedeværelse eller fravær af vækst. Mønstret af positive og negative resultater sammenlignes derefter med en MPN-tabel over statistiske sandsynligheder for at estimere antallet af mikroorganismer. Derefter angives MPN-værdi for 100 ml af prøven. MPN bruges i vid udstrækning til at påvise coliforme bakterier, der findes i vandprøver.
Figur 02: MPN-tabel
Hvad er forskellen mellem CFU og MPN?
CFU vs MPN |
|
| CFU er et mål, der bruges til at udtrykke antallet af levedygtige bakterie- eller svampekolonier i en given prøve. | MPN er et alternativt mål til CFU og måler antallet af levedygtige bakterieceller i en væskeprøve. |
| Unit | |
| CFU/ml eller CFU/g | MPN/100 ml |
| Beregning | |
| CFU beregnes ved at tælle antallet af kolonier dyrket på agarplader. | MPN beregnes ved at sammenligne positive og negative mønstre af rørene med MPN statistisk tabel. |
| Seriel fortyndingsteknik | |
| Seriel fortynding udføres før anbringelse af prøverne på agarplader. | Seriel fortynding udføres norm alt ikke, når MPN beregnes |
| Metodes | |
| Spredeplademetode og hældeplademetode er to typer metoder, der udføres for at opnå CFU. | Multiple tube-fermentering er metoden, der udføres for at opnå MPN-værdi. |
Oversigt – CFU vs MPN
Måling af den mikrobielle vækst er påkrævet af mange årsager. I fødevareforarbejdningsanlæg er det nødvendigt at måle niveauet og typen af mikroorganismer i fødevarer. I fødevareindustrien og medicin er det nødvendigt at sikre, at steriliseringsbehandlinger anvendes effektivt. I spildevandsrensningsanlæg er det påkrævet at tage mikrobieltælling rutinemæssigt. Ved optimering af procedure i molekylærbiologi er det nødvendigt at måle antallet af kolonier på plader. Derfor er der forskellige opregnings- og vækstmålingsmetoder tilgængelige. CFU og MPN er to sådanne metoder, der i vid udstrækning anvendes på forskellige områder. CFU er et mål for antallet af levedygtige bakterie- og svampekolonier til stede i en given prøve. Det beregnes ved hjælp af standard pladetællingsmetode eller levedygtig pladetællingsmetode. MPN er et andet mål, der udtrykker antallet af bakterieceller, der er til stede i et givet volumen af væskeprøven. Det beregnes ved hjælp af flerrørsfermenteringsmetode og MPN-tabel. Dette er forskellen mellem CFU og MPN.
Download PDF-version af CFU vs MPN
Du kan downloade PDF-versionen af denne artikel og bruge den til offline-formål i henhold til citatnoter. Download venligst PDF-versionen her Forskel mellem CFU og MPN.
