Nøgleforskel – Transformanter vs Rekombinanter
Rekombination og transformation er to afgørende trin i genteknologi, hvor en organismes egenskaber bevidst modificeres ved at manipulere dens genetiske materiale. Rekombination er en proces, hvor fremmed DNA inkorporeres i et vektorgenom, og rekombinant DNA-molekyle dannes. Transformation er det næste trin, hvor rekombinant molekyle kommer ind i værtsorganismen. Værtscellen eller organismen letter ekspression af det rekombinante molekyle. Den vigtigste forskel mellem transformanter og rekombinanter er, at transformanter er cellerne eller organismerne, der tager rekombinant molekyle indeni og letter ekspression, mens rekombinanter er vektorerne, der tillader indsættelse af det fremmede DNA i dets genom og transport ind i værtstransformanter til ekspression.
Hvad er transformanter?
Transformanter er de celler eller organismer, hvori rekombinant DNA optages til ekspression. Bakterier bruges almindeligvis som værtsorganismer i genteknologi, da de er nemme at dyrke, formere og håndtere under laboratorieforhold, og transformationsprocessen er let sammenlignet med andre organismer. Den mest populære værtsbakterie brugt i genteknologi er bakterien E coli.
Under transformationsprocessen induceres værtsceller til at optage rekombinanterne. Nogle værtsceller optager dog ikke rekombinante molekyler. De er kendt som ikke-transformanter, og de celler, der indeholder rekombinante DNA-molekyler indeni, er kendt som transformanter. Selektion af transformanter fra ikke-transformanter udføres ved anvendelse af selekterbare markører i molekylærbiologi. Selekterbare markører indsættes i vektorgenomet sammen med DNA-insertet. Almindeligt anvendte selekterbare markører er antibiotika-resistente gener. Markørgener letter differentieringen af transformanter og fortsætter processen. Efter transformationsprocessen dyrkes bakterien i et antibiotikumholdigt medium. Kun transformanterne er i stand til at vokse på det medium, da de har rekombinanterne indeni.
Når det rekombinante DNA-molekyle er transformeret inde i værtsorganismen, kan det fremmede DNA enten integreres i værtscellens genom eller forblive ikke-integreret i cytoplasmaet. Ekspressionen og replikationen af det fremmede DNA forekommer imidlertid i værtsorganismen og giver det ønskede resultat af processen.
Hvad er rekombinanter?
En rekombinant er en organisme eller en celle, som besidder rekombineret genom, der indeholder fremmed DNA. Rekombinanter er et resultat af den genteknologiske proces. De er kunstigt konstrueret in vitro ved at indsætte generne af interesse og modificere genomet. Ofte fungerer bakterielle plasmider og bakteriofager som rekombinanter i genteknologi. Det har kimærer af forskellige DNA'er. Rekombinant DNA-molekyle bærer fremmed DNA til værtsorganismen og får det til at udtrykke og danne det ønskede produkt.
Rekombinante molekyler er konstrueret ved hjælp af restriktionsendonukleaser og DNA-ligaser. Det ønskede DNA-fragment separeres fra den oprindelige organisme og indsættes i vektoren for at gøre det rekombinante til transformation. Skæring af genet af interesse og åbning af vektororganismen bør udføres ved hjælp af det samme restriktionsenzym for at skabe kompatible klæbrige ender for at forbinde dem. Når først det fremmede DNA er inkorporeret i vektorgenomet, er det kendt som rekombinant eller det rekombinante DNA-molekyle.
Figur 02: Rekombinant DNA
Hvad er forskellen mellem transformanter og rekombinanter?
Transformanter vs rekombinanter |
|
| Transformanter er de celler, som har et rekombinant DNA-molekyle indeni. | Rekombinanter er bærermolekylerne, som har fremmed DNA indsat i eget genom. |
| Udtryk af fremmed DNA | |
| De er værtscellerne, som er i stand til at udtrykke det rekombinante DNA. | De burde være i stand til at replikere sig selv i værtsorganismen. |
| Udvalg | |
| Celler, der let kan dyrkes og formere sig, udvælges som værtsceller. | De skal være lette at udtrække og skal indeholde valgbare markører. |
Opsummering – Transformanter vs rekombinanter
Transformanter er celler eller organismer med rekombinante DNA-molekyler inde i dem. Rekombinanter er de organismer eller celler, der har gennemgået genetisk rekombination og har fremmed DNA i deres genomer. Bakterieceller bruges ofte som værtsceller til transformation, og plasmider og bakteriofager bruges ofte som vektorer i rekombinant DNA-teknologi. Dette er forskellen mellem transformanter og rekombinanter.
