Nøgleforskel – YAC vs BAC-vektorer
Vektorer bruges til molekylær kloning. En vektor kan defineres som et DNA-molekyle, der opfører sig som et vehikel til at transportere fremmed genetisk materiale ind i en anden celle. En vektor, der indeholder fremmed DNA, er kendt som rekombinant DNA, og den bør have evnen til at replikere og udtrykke den i værtsorganismen. Gær kunstigt kromosom (YAC) og bakterielt kunstigt kromosom (BAC) er to typer vektorer involveret i kloning. Den vigtigste forskel mellem YAC og BAC er, at YAC er et kunstigt konstrueret vektorsystem, der bruger en specifik region af gærkromosom til at indsætte store segmenter af genetiske materialer til gærceller, mens BAC er et kunstigt konstrueret vektorsystem, der bruger en specifik region af E.coli-kromosom til at indsætte store DNA-segmenter i E. coli-celler.
Hvad er YAC-vektorer?
YAC (Gær kunstigt kromosom) er et kunstigt bygget kromosom, som har evnen til at bære et stort segment af fremmed DNA og replikere i gærcellerne. Den har en centromer, telomerer samt autonomt replikerende sekvenser, der er essentielle for replikation og stabilitet. YAC bør også bære en selektiv markør eller markører og restriktionssteder for at gøre det til en effektiv kloningsvektor. En stor sekvens fra 1000 kb til 2000 kb kan indsættes i YAC og overføres til gær. Transformationseffektiviteten af YAC er meget lav.
Figur 01: YAC Vector
Hvad er BAC-vektorer?
Bakterielt kunstigt kromosom (BAC) er et kunstigt konstrueret kromosom til molekylær kloning. Det har specifikke regioner af E. coli F-plasmid, og det er cirkulært og supersnoet. BAC er udviklet til at klone DNA-fragmenter til bakterier, især til E. coli. Det kan bære DNA-fragmenter med størrelser op til 300 kb. Sammenlignet med YAC er BAC-kloningsindsatser mindre i størrelse. BAC'er blev udviklet i 1992, og det er stadig populært på grund af dets stabilitet og lette konstruktion. BAC'er er også nyttige til udvikling af vacciner.
Figur 02: BAC-vektor i molekylær kloning
Hvad er forskellen mellem YAC- og BAC-vektorer?
YAC vs BAC Vectors |
|
| YAC er et gensplejset kromosom med brug af gær-DNA med henblik på kloning. | BAC er et gensplejset DNA-molekyle, der bruger E. coli-DNA til kloning. |
| Køn | |
| YAC'er blev designet til at klone store fragmenter af genomisk DNA ind i gær. | BAC'er blev udviklet til kloning af store genomiske fragmenter ind i Escherichia coli. |
| Indsæt længde | |
| YAC'er kan indeholde genomiske inserts på størrelse med megabase.(1000 kb – 2000 kb). | BAC'er kan bære indsatser på 200–300 kb eller mindre. |
| Bygning | |
| YAC DNA er svært at rense intakt og kræver høj koncentration for at generere YAC vektorsystem. | BAC er let at rense intakt og kan nemt konstrueres. |
| Chimerism | |
| YAC'er er ofte kimære. | BAC'er er sjældent kimære. |
| Stabilitet | |
| YAC er ustabil. | BAC er stabil. |
| Ændringer | |
| Gærrekombination er meget mulig og forbliver altid aktiv. Derfor kan den generere sletninger og andre omarrangeringer i en YAC. | E. coli-rekombination forhindres og tændes, når det er nødvendigt. Derfor reducerer det de uønskede omarrangeringer i BAC'er. |
| Vedligeholdelse | |
| Manipulation af rekombinante YAC'er kræver norm alt, at YAC overføres til E. coli til efterfølgende manipulation. Derfor er det en besværlig proces. | BAC-modifikation forekommer direkte i E. coli. Så der er ikke behov for DNA-overførsel. Derfor er processen ikke besværlig. |
Oversigt – YAC vs BAC Vectors
YAC er blevet et væsentligt forskningsværktøj i kloningsprocesser på grund af dets evne til at klone store fragmenter af DNA ind i værtsorganismen. YAC'er har dog flere ulemper som vektorer såsom konstruktionsvanskeligheder, kimærisme, ustabilitet osv. For at overvinde disse problemer har forskere derfor udviklet BAC-vektorer. BAC er blevet konstrueret ved hjælp af specifikke regioner af E. coli kromosom. Det er en stabil vektor og kan nemt konstrueres. Længden af DNA, som BAC kan håndtere, er dog op til 20 gange mindre end YAC. Dette er forskellen mellem YAC og BAC vektorsystemer. I dag foretrækkes BAC frem for YAC i laboratorierne.
