Nøgleforskellen mellem gelfiltrering og affinitetskromatografi er, at gelfiltreringskromatografi afhænger af forskellene i molekylvægt eller størrelse af analytprøven, hvorimod affinitetskromatografi afhænger af affiniteten af en analyt til en immobiliseret ligand.
Begrebet kromatografi i analytisk kemi refererer til processen med adskillelse af komponenter i en blanding ved hjælp af forskellige teknikker. Kromatografi er et fællesnavn, der repræsenterer en række forskellige metoder til adskillelse.
Hvad er gelfiltreringskromatografi?
Gelfiltreringskromatografi er en analytisk teknik, hvor adskillelsen af komponenter afhænger af forskellen i molekylvægt eller størrelse. Denne teknik er også kendt som størrelsesudelukkelseskromatografi eller molekylsigtekromatografi. Separationsteknikken i denne proces afhænger af molekylernes forskellige evne i prøven til at trænge ind i porerne i gelfiltreringsmediet.
I gelfiltreringsteknikken indeholder den stationære fase perler af hydreret, svampelignende materiale med porer af molekylære dimensioner, der indeholder et snævert område af størrelser. Hvis vi fører en vandig opløsning bestående af molekyler af forskellig størrelse gennem en søjle, der indeholder disse "molekylsigter", bevæger de molekyler, der er større end porerne i filtreringsmediet, sig hurtigt gennem søjlen. I modsætning hertil kommer de mindre molekyler ind i gelens porer og har en tendens til at bevæge sig langsomt gennem søjlen. Molekyler eluerer fra søjlen i rækkefølge efter faldende molekylstørrelse. Her er udelukkelsesgrænsen for gelen molekylmassen af de mindste molekyler, der ikke er i stand til at trænge ind i porerne i en given gel.
Der er forskellige typer gelfiltreringsteknikker, såsom indirekte gelfiltreringsmetode, steady-state gelfiltrering, gelperledialyse osv. Indirekte gelfiltreringskromatografi er nyttig til bestemmelse af frie skjoldbruskkirtelhormoner. Steady-state gelfiltreringskromatografi er en indirekte teknik, der mest er anvendelig til måling af frie steroider som cortisol, testosteron osv. Gelperledialyse er på den anden side en modifikation af steady-state gelfiltrering, der er forholdsvis enklere.
Hvad er affinitetskromatografi?
Affinitetskromatografi er en analytisk teknik og en separationsmetode, der afhænger af en specifik bindingsinteraktion mellem en immobiliseret ligand og dens bindingspartner. Nogle eksempler omfatter antistof-antigen-binding, enzym-substrat-binding og enzym-inhibitor-binding. Derfor har denne teknik mange vigtige anvendelser i nukleinsyreoprensning, proteinoprensning fra celleekstrakter og oprensning fra blod.
I denne teknik er den vigtigste egenskab ligandimmobilisering. Vi kan bruge forskellige materialer som akrylater og silicagel til dette. Det er vigtigt at forhindre sterisk interferens af målmolekylet til liganden. Desuden er en inhibitor knyttet til den faste fase. Vi kalder denne inhibitor en spacer. Klassisk består en spacer af en kulbrintekæde.
Den stationære fase af affinitetskromatografien indeholder kernen, spaceren og liganden. Nogle gange har den også en metalion, der er koblet til liganden. Den mest foretrukne faste fase til den stationære fase i denne teknik er agarosegel, fordi den let dispenseres til at fylde og pakke søjlen med harpikslejer af enhver størrelse, og den er stor nok til, at biomolekyler kan flyde frit ind i og gennem perlerne. Liganderne kan kovalent binde til perlepolymeren på forskellige måder. De mest almindelige spacerforbindelser er cyanogenbromid, epoxid, epoxid med C6-syre og diamin. På den anden side er den ligand, vi kan bruge, forskellig afhængig af målet, f.eks. antistof-antigen, jern- eller aluminiumioner-phosphoproteiner, avidin-biotin, glutathion-GST, chelator-His-mærkede proteiner osv.
Hvad er forskellen mellem gelfiltrering og affinitetskromatografi?
Kromatografi er en vigtig analytisk teknik. Gelfiltreringskromatografi og affinitetschromatografi er to vigtige variationer af kromatografi. Den vigtigste forskel mellem gelfiltrering og affinitetskromatografi er, at gelfiltreringskromatografi afhænger af forskellene i molekylvægt eller størrelse af analytprøven, hvorimod affinitetskromatografi afhænger af affiniteten af en analyt til en immobiliseret ligand.
Opsummering – Gelfiltrering vs affinitetskromatografi
Der er forskellige typer kromatografiske teknikker afhængigt af deres anvendelse og arten af analytprøven. Gelfiltrering og affinitetskromatografi er to sådanne typer teknikker. Den vigtigste forskel mellem gelfiltrering og affinitetskromatografi er, at gelfiltreringskromatografi afhænger af forskellene i molekylvægt eller størrelse af analytprøven, hvorimod affinitetskromatografi afhænger af affiniteten af en analyt til en immobiliseret ligand.
