Nøgleforskellen mellem DNA- og RNA-isolering er, at DNA-isolering er en procedure, hvor en type nukleinsyre kaldet DNA ekstraheres fra en biologisk celle, mens RNA-isolering er en procedure, hvor en type nukleinsyre kaldet RNA er udvundet fra en biologisk celle.
Nukleinsyreisolering er udgangspunktet i en bred vifte af downstream-applikationer. Den høje kvalitet af nukleinsyrer i startprøverne er en nøglefaktor for succesen af efterfølgende nedstrømsapplikationer. Nukleinsyreisolering kunne defineres som en række trin til opnåelse af nukleinsyre i en renhedsprøve, der kan anvendes til forskellige nedstrømspåføringstrin. Formålet med nukleinsyreekstraktion er at desintegrere cellemembranen og opnå den maksimale eliminering af lipider og proteiner for at opnå rene nukleinsyrer såsom DNA eller RNA.
Hvad er DNA-isolering?
DNA-isolering er en rutineprocedure, hvor en type nukleinsyre kaldet DNA ekstraheres fra en biologisk celle. DNA-isolering udføres ved at ekstrahere DNA fra blod, frosne vævsprøver og paraffinvævsblokke. Der er tre hovedtrin i DNA-isolering, herunder cellelyse, udvinding af DNA og udfældning. Ved cellelyse adskilles cellerne i en prøve fra hinanden, ofte ved fysiske midler såsom formaling eller vortexing og sættes i en opløsning indeholdende s alt. Norm alt hjælper de positivt ladede natriumioner i s altet med at beskytte de negativt ladede fosfatgrupper, der løber langs DNA'ets rygrad. Senere tilsættes et vaskemiddel for at nedbryde lipiderne i cellemembranen og cellekernerne, som frigiver DNA, da disse membraner forstyrres.
Figur 01: DNA-isolering
DNA-ekstraktion udføres for at få en ren prøve af DNA. Ofte tilsættes et proteaseenzym for at nedbryde DNA-associerede proteiner og andre cellulære proteiner. Desuden kan noget af det cellulære affald fjernes ved at filtrere prøven. Til sidst udfældes DNA'et ved at bruge alkohol. Ydermere, hvis der er meget DNA, kan et nærigt hvidt bundfald i slutningen af proceduren observeres.
Hvad er RNA-isolering?
RNA-isolering er en procedure, hvor en type nukleinsyre kaldet RNA ekstraheres fra en biologisk celle. Denne procedure kompliceres ofte af tilstedeværelsen af ribonuklease-enzymer i celler og væv, der nedbryder RNA. Adskillige metoder bruges i molekylærbiologi til at isolere RNA fra prøver, såsom guanidinium-thiocyanat-phenol-chloroform-ekstraktion.
Figur 02: RNA-isolering
RNA-isolering består norm alt af flere trin, herunder cellelyse og homogenisering, quenching af biokemiske processer, nukleinsyreopdeling, RNA-hentning, råoprensning og vurdering af RNA-kvaliteten. Den filterpapirbaserede lysis- og elueringsmetode har en høj gennemløbskapacitet ved RNA-ekstraktion. Desuden er RNA-ekstraktion i flydende nitrogen ved at bruge en morter og støder også en meget nyttig metode, da den forhindrer ribonukleaseaktivitet.
Hvad er lighederne mellem DNA- og RNA-isolering?
- DNA- og RNA-isolering er to typer nukleinsyreisoleringsprocedurer.
- Begge procedurer har lignende grundlæggende trin, såsom cellelyse, ekstraktion og oprensning.
- Disse procedurer isolerer vigtige nukleinsyretyper, der har en række downstream-applikationer.
- De udføres i laboratorieopsætninger.
- De kan udføres ved hjælp af fremstillede sæt.
Hvad er forskellen mellem DNA- og RNA-isolering?
I DNA-isolering udvindes en type nukleinsyre kaldet DNA fra en biologisk celle, mens der ved RNA-isolering udvindes en type nukleinsyre kaldet RNA fra en biologisk celle. Dette er således den vigtigste forskel mellem DNA- og RNA-isolering. Endvidere udføres DNA-isoleringen norm alt ved omkring pH 7 til 8, hvorimod RNA-isolering norm alt udføres ved omkring pH 4,5.
Nedenstående infografik præsenterer forskellene mellem DNA- og RNA-isolering i tabelform til sammenligning side om side.
Oversigt – DNA vs RNA-isolering
DNA- og RNA-isolering er to typer nukleinsyreisoleringsprocedurer. DNA-isolering er en procedure, hvor DNA ekstraheres fra en biologisk celle. RNA-isolering er en procedure, hvor RNA ekstraheres fra en biologisk celle. Så dette er den vigtigste forskel mellem DNA- og RNA-isolering.
