Nøgleforskellen mellem kolorimetrisk og fluorometrisk assay er, at kolorimetrisk assay bestemmer koncentrationen af farvede forbindelser i en opløsning, mens fluorometrisk assay bestemmer den kinetiske mekanisme af en opløsning.
Et biokemisk assay er en teknik, der detekterer eller kvantificerer aktiviteten af et biologisk molekyle eller et biologisk stof analytisk. Det er en in vitro proces. Kolorimetrisk assay og fluorometrisk assay er to typer almindelige biokemiske assays udført i laboratorier. Flere teknikker såsom ELISA og western blotting er også komplekse biokemiske assays til kvantificering af metabolisk aktivitet og måling af den funktionelle adfærd af biomolekyler såsom proteiner, enzymer og andre små molekyler. Disse typer assays bruges til identifikation af protein-DNA-, protein-RNA- og protein-protein-interaktioner.
Hvad er en kolorimetrisk analyse?
En kolorimetrisk analyse er en teknik, der bestemmer koncentrationen af farvede forbindelser i en opløsning. Med andre ord er kolorimetrisk assay en reaktion, der fører til en farveændring på grund af en enzymatisk eller kemisk reaktion mellem reagenser og analytter. Kolorimetriske analyser praktiseres i biokemi for at teste for enzymer, specifikke forbindelser, hormoner, antistoffer og andre analytter. De bruger kolorimetre eller spektrofotometre. Kolorimetre er instrumenter, der karakteriserer farvede prøver for at give et objektivt mål for farveegenskaber. Et spektrofotometer er en enhed, der måler lysintensiteten som en funktion af lysets farve eller bølgelængde.
Figur 01: Kolorimetrisk analyse
Hvordan fungerer en kolorimetrisk analyse?
I en kolorimetrisk analyse fremstilles en plade med et bestemt antistof bundet til brønde. Derefter tilsættes prøven. Dette kan tillade prøven at binde til antistoffet. Derefter tilsættes et detektionsantistof og et substrat til brøndene for at reagere med detektionsproben. Stopopløsning tilsættes til sidst før aflæsningen. En tom brønd kaldet blank efterlades uden prøven. I det kolorimetriske assay, jo mørkere farve, desto større er analytkoncentrationen. Norm alt kræves der kun én bølgelængde for at tage aflæsningen. Men hvis der er en referencemåling, bruges to eller flere bølgelængder.
Hvad er en fluorometrisk analyse?
Det fluorometriske assay er en teknik, der bestemmer den kinetiske mekanisme for enzymreaktioner. Et fluorometrisk assay finder sted med en dannelse af et fluorescerende produkt fra et ikke-fluorescerende substrat eller omvendt. Denne analyse gør også brug af fluorescensresonansenergioverførsel (FRET), hvor den enzymatiske reaktion ændrer positionen af to fluoroforer i substratet og dermed ændrer fluorescensintensiteten.
Figur 02: Fluorometrisk analyse
Fluorometriske assays er generelt meget mere følsomme end andre assays. De diagnostiske enzymestimater i vævs-, celle- eller væskeprøver fra patienter øges på grund af dens højere følsomhed.
Hvordan fungerer en fluorometrisk analyse?
I et fluorometrisk assay tilsættes et substrat til prøven i pladen, og fluorescensresponset tages ved hjælp af pladelæseren. Her måles hver celle separat. Uigennemsigtige plader anvendes i fluorometriske analyser. Dette reducerer spredningen af lys. To bølgelængder er nødvendige for denne type assay. Den ene bølgelængde er til at detektere excitationen, og den anden bølgelængde er til emissionen.
Hvad er lighederne mellem kolorimetrisk og fluorometrisk analyse?
- Colorimetrisk assay og fluorometrisk assay er to typer biokemiske assays.
- Begge analyser udføres til medicinsk diagnostik.
- Disse analyser involverer en enzymatisk reaktion.
- Begge analyser involverer et substrat og analytter.
Hvad er forskellen mellem kolorimetrisk og fluorometrisk analyse?
Et kolorimetrisk assay er en teknik, der bestemmer koncentrationen af farvede forbindelser i en opløsning, mens fluorometrisk assay er en teknik, der bestemmer den kinetiske mekanisme af enzymreaktioner. Så dette er den vigtigste forskel mellem kolorimetrisk og fluorometrisk assay. Desuden er de fluorometriske assays mere følsomme end de kolorimetriske assays; således har fluorometriske assays evnen til at detektere flere analytter. Dette er således en anden vigtig forskel mellem kolorimetrisk og fluorometrisk assay. Desuden kræver fluorometriske analyser to bølgelængder, mens kolorimetriske analyser udføres med én bølgelængde.
Nedenstående infografik viser flere forskelle mellem kolorimetrisk og fluorometrisk assay.
Oversigt – kolorimetrisk vs fluorometrisk analyse
Et biokemisk assay er en analytisk proces, der bruges til at bestemme og kvantificere cellulære metaboliske reaktioner. Kolorimetrisk assay og fluorometrisk assay er to typer biokemiske assays. Kolorimetrisk assay er en reaktion, der fører til en farveændring på grund af en enzymatisk eller kemisk reaktion mellem reagenser og analytter, mens fluorometrisk assay er en teknik, der bruges til at bestemme den kinetiske mekanisme for enzymreaktioner. Begge analyser afhænger af en enzymatisk reaktion, der involverer et substrat og en analyt. Fluorometriske assays er mere følsomme end kolorimetriske assays. Det vigtigste er, at fluorometriske analyser kræver to bølgelængder, mens kolorimetriske analyser kan udføres med kun én bølgelængde. Dette opsummerer således forskellen mellem kolorimetrisk og fluorometrisk assay.
