Nøgleforskellen mellem genamplifikation og genkloning er, at genamplifikationen er processen med at lave mange kopier af genet af interesse in vitro ved en polymerasekædereaktion. Men genkloning er en proces med at lave mange kopier af genet af interesse in vivo ved at lave et rekombinant plasmid og transformere det til en værtsbakterie.
Et gen er et specifikt fragment af DNA, der koder for et protein. En organisme besidder tusindvis af gener. Desuden er det muligt at multiplicere DNA-sekvenserne af vigtige gener ved hjælp af molekylærbiologiske teknikker. Genamplifikation og genkloning er to sådanne procedurer. Begge procedurer producerer mange kopier af et gen af interesse. Der er dog en forskel mellem genamplifikation og genkloning med hensyn til deres metodik.
Hvad er genforstærkning?
Genamplifikation er processen med at lave kopier af et bestemt gen ved hjælp af polymerasekædereaktion. For at amplificere et gen skal DNA'et fra den pågældende organisme ekstraheres ved hjælp af en korrekt DNA-ekstraktionsprotokol. Derefter bør det ekstraherede dobbeltstrengede DNA denatureres for at opnå adskilte enkeltstrenge. Det næste trin inkluderer brug af en PCR-reaktion til at lave kopier af genet af interesse. Desuden indeholder PCR-blandingen nødvendige primere, nukleotider, DNA-polymeraseenzym, template-DNA og andre ingredienser. Ved afslutningen af PRC-programmet finder amplifikation af genet af interesse sted.
Figur 01: Genforstærkning
Yderligere er genamplifikation et indledende trin i påvisningen af en specifik sekvens, identifikation af en organisme, diagnosticering af sygdomme og fremstilling af genbiblioteker osv.
Hvad er genkloning?
Genkloning er en metode inden for genteknologi til at lave genbiblioteker eller lave mange kopier af genet af interesse. Denne proces involverer fremstilling af et rekombinant plasmid og transformation af det rekombinante plasmid til en værtscelle, især en bakteriecelle. Klon er en identisk kopi af den originale organisme eller et molekyle. Genkloning kan lave tusindvis af genkloner.
Figur 02: Genkloning
Når genet af interesse er identificeret, kan det adskilles fra genomet af en bestemt organisme ved at begrænse det med specifikke restriktionsenzymer. Ved hjælp af det samme restriktionsenzym skal plasmider (vektorer) åbnes for at indsætte genfragmentet. Derefter transformeres det rekombinante plasmid til en værtsbakterie ved hjælp af forskellige metoder såsom elektroporering. Nogle af de rekombinante plasmider trænger ind i værtsbakterieceller. Ved hjælp af et antibiotikum kan de transformerede bakterier selekteres, isoleres og dyrkes i friske medier. Denne teknik hjælper således med at opnå millioner af genkloner.
Hvad er lighederne mellem genamplifikation og genkloning?
- Genamplifikation og genkloning er to molekylærbiologiske teknikker.
- I begge disse teknikker multipliceres en bestemt DNA-sekvens eller et gen i millioner eller tusinde gange.
- Desuden er begge teknikker af største betydning for mange videnskabelige områder.
Hvad er forskellen mellem genamplifikation og genkloning?
Genamplifikation er en proces, der laver kopier af et bestemt gen ved hjælp af in vitro-metoden kaldet PCR. På den anden side er genkloning en proces, der laver kopier af et bestemt gen ved hjælp af in vivo-metoden via konstruktion af rekombinante vektorer og multiplicering af dem i levende organismer. Så dette er den vigtigste forskel mellem genamplifikation og genkloning. Desuden tager genamplifikation kun et par timer, mens genkloning tager flere dage at fuldføre. Derfor kan vi også betragte dette som en forskel mellem genamplifikation og genkloning. Desuden viser genamplifikationsprocessen færre fejl, mens genkloningsprocessen viser flere fejl.
Den følgende infografik opsummerer forskellen mellem genamplifikation og genkloning.
Opsummering – Genforstærkning vs genkloning
Genamplifikation er processen med at lave kopier af det ønskede gen ved hjælp af polymerasekædereaktion under in vitro-betingelser, mens genkloning er processen med at lave kopier af et gen af interesse ved hjælp af et rekombinant DNA-molekyle og en levende organisme/vært bakterie. Dette er således den grundlæggende forskel mellem genamplifikation og genkloning.
