Nøgleforskel – RPMI vs DMEM
De fleste forskningsundersøgelser involverer dyrkning af dyreceller, og derfor kræver disse undersøgelser vedligeholdelse af dyrecellelinjer under særlige vækstbetingelser. Dyrecelledyrkning udføres bredt i farmakologiske undersøgelser for at identificere stofskifte, i sygdomsdiagnostik og i kræftforskning. Cellekulturmediet er et vigtigt aspekt af dyrecellekultur. Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) og Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) er to dyrkningsmedier, der bruges i dyrecelledyrkning. RPMI er et medium, der i vid udstrækning anvendes til dyrkning af pattedyrceller i suspensionskultur. DMEM er en modificeret type basalmedium med øgede aminosyre- og vitaminkoncentrationer op til en firedobling. DMEM bruges til dyrkning af celler i adhærente kulturer. Den vigtigste forskel mellem de to medier er mediets kultur. RPMI bruges på suspensionskulturer, hvorimod DMEM bruges til at dyrke adhærente celler.
Hvad er RPMI?
RPMI eller Roswell Park Memorial Institute Medium omtales også som RPMI 1640. Navnet på mediet blev afledt af det institut, hvor mediet blev opdaget. Dette medie er almindeligt anvendt i dyrecellekultur, især til vækst af pattedyrceller. De blev oprindeligt udviklet til at dyrke humane lymfocytter.
Følgende ingredienser er inkluderet i RPMI.
- Glucose
- pH-indikator (phenolrød)\
- S alte (natriumchlorid, natriumbicarbonat, dinatriumphosphat, kaliumchlorid, magnesiumsulfat og calciumnitrat)
- Aminosyrer
- Vitaminer (i-inositol, cholinchlorid, para-aminobenzoesyre, folinsyre, nikotinamid, pyridoxinhydrochlorid, thiaminhydrochlorid, calciumpantothenat, biotin og riboflavin, cyanocobalamin)
Det særlige ved RPMI er den øgede koncentration af fosfat i mediet. RPMI bruges i en atmosfære med 5 % kuldioxid. Dette vil give de maksimale og optimale betingelser for cellevækst. Mediets pH holdes på 8,0 af bicarbonatbuffersystemet.
Figur 01: Cellekultur på en petriskål
Anvendelser af RPMI i celledyrkning
- Dyrkning af humane T- og B-lymfocytter, knoglemarvsceller og hybridomer.
- Bruges til at studere humane neoplastiske celler.
Hvad er DMEM?
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) er et modificeret medium, der er kommercielt fremstillet. Den originale tekstur af det mellemstore pulver er gul. I DMEM øges vitaminkoncentrationen op til det firedobbelte og øger derved næringsindholdet i mediet.
DMEM modificeres også ved at tilføje flere s alte såsom jernnitrat, natriumpyruvat og nogle ikke-essentielle aminosyrer såsom serin og glycin. Formuleringen af glukose i mediet er også ændret. Den originale formulering er sammensat af 1000 mg/L glucose, hvorimod koncentrationen i DMEM øges op til 4500 mg/L. DMEM kræver også tilskud af et serummedium, da det ikke er et komplet medium. Oftest suppleres DMEM med Fetal Bovine Serum (FBS). FBS giver de nødvendige proteiner og vækstfaktorer til dyrkningsprocessen.
Mediets pH varierer ved tilsætning af natriumbicarbonat. pH i mediet før tilsætning af natriumbicarbonat er omkring 6,80 – 7,40, hvorimod pH efter tilsætning af natriumbicarbonat ligger i området 7,60 – 8,20. Mediets opbevaringstemperatur er 2 – 8 0C.
Figur 02: DMEM
Ansøgninger af DMEM
- At studere den plakdannende evne af polyomavirus i embryonale museceller.
- I undersøgelser af kontakthæmning.
- I forskning og analyse af kyllingecellekulturer.
Hvad er lighederne mellem RPMI og DMEM?
- Både RPMI og DMEM bruges i dyrecellekultur.
- Både RPMI- og DMEM-medier er flydende formuleringer.
- Både RPMI- og DMEM-medier indeholder de essentielle aminosyrer, vitaminer og uorganiske s alte, der kræves for vækst.
- Både RPMI- og DMEM-medier er ufuldstændige. Derfor bør serum tilsættes.
- Både RPMI- og DMEM-medier bruger glucose som sin kulstofkilde.
- Både RPMI- og DMEM-medier har en højere pH.
Hvad er forskellen mellem RPMI og DMEM?
RPMI vs DMEM |
|
| RPMI er et medium, der anvendes meget til at dyrke pattedyrsceller i en suspensionskultur. | DMEM er en modificeret type basalmedium med øgede aminosyre- og vitaminkoncentrationer. |
| Tilstedeværelse af ekstra fosfater | |
| Nuværende i RPMI. | Fraværende i DMEM. |
| Brug | |
|
Bruges til at dyrke celler i adhærente kulturer. Det er vant til
|
| Typer of Culture | |
| RPMI bruges til suspensionskulturer. | DMEM bruges til kulturer med cellevedhæftning. |
Oversigt – RPMI vs DMEM
Både RPMI og DMEM anvendes i vid udstrækning i dyrecelledyrkning, især til dyrkning af dyrecellelinjer, herunder lymfocytter in vitro. DMEM er et modificeret basalmedium, hvor der er en øget næringsstofkoncentration. RPMI udviklet af Roswell Park Memorial Institute, og det er også et medium, der bruges i dyrecelledyrkning, især til pattedyrs lymfocytter. Begge medier er kommercielt tilgængelige. Dette er forskellen mellem RPMI og DMEM.
