Nøgleforskel – nitrocellulose vs nylonmembran
Blotting er en vigtig teknik til påvisning af specifikke sekvenser af DNA, RNA og proteiner fra deres blandinger inden for molekylærbiologi. Det gøres ved hjælp af en membran kaldet blot. Der er forskellige blotting-teknikker såsom northern, southern og western blotting. Valg af en passende membran til blotting-processen bør gøres omhyggeligt for at forhindre uspecifik binding og forkerte påvisninger. Nitrocellulose, nylon og PVDF er almindeligt anvendte membraner i blotting-teknikker. De har forskellige egenskaber. Den vigtigste forskel mellem nitrocellulose og nylonmembran er, at nitrocellulosemembraner har højt proteinimmobiliseringspotentiale, mens nylonmembraner har højt nukleinsyreimmobiliseringspotentiale. Begge typer membraner bruges dog ofte i blotting-teknikker.
Hvad er en nitrocellulosemembran?
Nitrocellulosemembran er et almindeligt anvendt membranfilter i nukleinsyre- og proteinblotting-teknikker. Det har et højt proteinbindingspotentiale. Derfor er nitrocellulosemembraner meget brugt i western blotting-teknik. Nitrocellulosemembraner er kompatible med alle hybridiseringsteknikker og viser overlegen bindingskapacitet uden interferens. Nitrocellulosemembraner er naturligt hydrofile i naturen. De laver hydrofil interaktion med molekyler og immobiliserer dem effektivt på membranen. Kommercielle nitrocellulosemembraner fås i to porestørrelser: 0,45 og 0,2 µm.
Figur 01: Nitrocellulosemembran brugt til western blotting
Hvad er en nylonmembran?
Nylonmembran er en anden type kommerciel membran, der bruges til blotting-teknikker. Det bruges alternativt med nitrocellulosemembraner til southern og northern blotting. Nylonmembraner er ideelle til southern blotting end nitrocellulose på grund af deres høje affinitet til binding med DNA. På grund af flere unikke egenskaber ved nylonmembraner bruger forskere almindeligvis nylonmembraner til southern og northern blotting i stedet for over nitrocellulosemembran. Nylonmembraner anbefales også til stripning og reprobing i modsætning til nitrocellulose.
Figur 02: Nylonmembran brugt til southern blotting
Hvad er forskellen mellem nitrocellulose og nylonmembran?
Nitrocellulose vs Nylon Membran |
|
| Nitrocellulosemembraner er skøre. | Nylonmembraner er mindre skøre. |
| Handling | |
| De er svære at håndtere. | De er nemme at håndtere. |
| Reprobing | |
| Ikke-understøttede nitrocellulosemembraner er svære at efterprøve. | Reprobing er let med nylonmembraner. |
| Kompatibilitet med forskellige opbevaringsbetingelser | |
| Nitrocellulosemembraner har mindre styrke til at modstå forskellige opbevaringsforhold. | Nylonmembraner reagerer mere robust på forskellige opbevaringsforhold. |
| Brug | |
| Forbefugtning er påkrævet. | Forbefugtning er ikke påkrævet til nylonmembraner. |
| Hydrofil natur | |
| Nitrocellulosemembraner er hydrofile af natur, men er mindre hydrofile end nylonmembraner. | De er meget hydrofile af natur. |
| Immobiliseringspotentiale | |
| Nitrocellulosemembraner har mindre affinitet til nukleinsyrer. Men det har en høj affinitet til proteiner. | Nylonmembraner har et højt bindingspotentiale med nukleinsyrer end nitrocellulosemembraner. |
Oversigt – nitrocellulose vs nylonmembran
Nitrocellulose- og nylonmembraner er specielle ark, der bruges i blotting-teknik til at gengive båndmønsteret på gelen. De gør det muligt at påvise en specifik sekvens eller et protein fra blandingerne ved at immobilisere dem på membranen. Når først molekylerne er immobiliseret på membranen, kan den bruges som et substrat til hybridiseringsanalyse med mærkede prober. Nitrocellulosemembran bruges almindeligvis til proteinpåvisning i western blotting-teknik på grund af dens høje bindingsaffinitet med proteiner. Nylonmembraner bruges ofte til southern og northern blotting. Dette er forskellen mellem nitrocellulose og nylonmembran.
