Nøgleforskellen mellem agarose- og polyacrylamidgelelektroforese er, at agarosegelelektroforese bruger horisont alt hældte agarosegeler til at adskille forholdsvis større fragmenter af DNA, mens polyacrylamidgelelektroforese bruger vertik alt hældte polyacrylamidgeler til at adskille kortere nukleinsyrefragmenter.
Elektroforese er en type teknik, der bruger et elektrisk felt påført på tværs af en gelmatrix til at adskille biomolekyler som DNA, RNA og proteiner. Denne adskillelse af biomolekyler såsom DNA, RNA og proteiner gennem elektroforese er baseret på ladning og størrelse. Prøver fyldes i gelens brønde. Senere påføres det elektriske felt hen over gelen. Feltet får negativt ladede molekyler til at bevæge sig mod den positive elektrode. Gelmatrixen fungerer som en molekylsigte, hvorigennem de mindste molekyler passerer eller bevæger sig hurtigt, mens større molekyler bevæger sig langsomt. Dette muliggør adskillelse af molekyler baseret på ladning og størrelse. Derfor er agarose- og polyacrylamidgelelektroforese to typer gelelektroforeseteknikker, der hovedsageligt hjælper med at adskille molekyler baseret på deres størrelse og ladning.
Hvad er agarosegelelektroforese?
Agarosegelelektroforese er en teknik, der bruger agarosegeler til at adskille biomolekyler såsom DNA og RNA. Det er en teknik, der bruges til at adskille nukleinsyrer primært efter størrelse. Hovedforbindelsen kaldet agarose, der anvendes i denne teknik, er et polysaccharid. Det kommer fra tang. Agarose kan opløses i kogende buffer og kan derefter hældes i en bakke, der holdes vandret. I bakken bliver det størknet, når det køler ned til en plade. Agarosegeler hældes med en kam på plads for at lave brønde, hvori nukleinsyrer såsom DNA eller RNA fyldes, når gelen er størknet.
Figur 01: Agarosegelelektroforese
Gelen nedsænkes senere i en passende buffer, og en strøm påføres hen over gelen. DNA har en ensartet negativ ladning, der er uafhængig af sekvenssammensætningen af molekylet. Derfor vil DNA-molekyler migrere fra katoden (-) mod anoden (+). Migrationshastigheden er direkte afhængig af molekylets størrelse. De største makromolekyler har sværest ved at navigere gennem gelen. På den anden side glider de mindre makromolekyler hurtigt og ret nemt igennem gelen.
Hvad er polyakrylamidgelelektroforese?
Polyacrylamidgelelektroforese (PAGE) er en teknik, der bruger polyacrylamidgeler til at adskille biomolekyler. Det er en teknik, der er meget brugt til at adskille biologiske makromolekyler, norm alt proteiner og nukleinsyrer, i henhold til deres elektroforetiske mobilitet. Hydratiseringen af acrylonitril resulterer i dannelsen af acrylamidmolekyler af nitrilhydratase. Acrylamid er opløseligt i vand, og ved tilsætning af frie radikal-initiatorer polymeriserer akrylamid, hvilket resulterer i dannelsen af polyacrylamidgel. Norm alt resulterer øgede koncentrationer af akrylamid i nedsat porestørrelse i gelen. Polyacrylamidgeler hældes lodret i modsætning til agarosegeler.
Figur 02: Polyacrylamidgelelektroforese
I polyacrylamidgelelektroforese kan molekylerne køre i deres native tilstand, hvilket bevarer molekylernes højere ordens struktur. Denne metode kaldes native PAGE. Alternativt kan et kemisk denatureringsmiddel også tilsættes for at fjerne den højere ordens struktur og gøre molekylet til et ustruktureret molekyle, hvis mobilitet kun afhænger af dets længde. Denne type kaldes SDS-PAGE.
Hvad er lighederne mellem agarose og polyacrylamidgelelektroforese?
- Agarose- og polyacrylamidgelelektroforese er to typer gelelektroforeseteknikker.
- Faktisk er de molekylærbiologiske teknikker.
- Begge teknikker bruges til at detektere biologiske makromolekyler som DNA og proteiner.
- Disse teknikker udføres af dygtige teknikere eller forskere.
- I begge teknikker er adskillelsen af makromolekyler baseret på ladningen og størrelsen.
- Begge teknikker tillader adskillelse af nukleinsyrer som DNA og RNA.
Hvad er forskellen mellem agarose og polyacrylamidgelelektroforese?
Agarosegelelektroforese er en teknik, der bruger horisont alt hældte agarosegeler til at adskille biomolekyler, mens polyacrylamidgelelektroforese er en teknik, der bruger vertik alt hældte polyacrylamidgeler til at udskille biomolekyler. Dette er den vigtigste forskel mellem agarose- og polyacrylamidgelelektroforese. Endvidere bruges agarosegelelektroforese til adskillelse af DNA og RNA, mens polyacrylamidgelelektroforese bruges til adskillelse af nukleinsyrer såsom DNA, RNA eller proteiner.
Den følgende tabel opsummerer forskellen mellem agarose- og polyacrylamidgelelektroforese.
Opsummering – Agarose vs Polyacrylamid Gel Elektroforese
Agarose- og polyacrylamidgelelektroforese er to typer gelelektroforeseteknikker, der bruges i molekylærbiologiske laboratorier. Agarosegelelektroforese bruger en agarosegel til at adskille biomolekyler. Agarose er generelt ikke giftigt for mennesker, mens polyacrylamid er giftigt for mennesker. Desuden viser agarosegelelektroforese en lav opløsning, mens polyacrylamidgelelektroforese viser en mere opløsning. Polyacrylamidgelelektroforese bruger en polyacrylamidgel til at adskille biomolekyler. Dette opsummerer forskellen mellem agarose- og polyacrylamidgelelektroforese
