Nøgleforskellen mellem mikronukleus- og kometassay er, at mikronukleusassay er vigtigt for at kontrollere kromosombeskadigelse som følge af mutageneksponering, mens kometassay er vigtigt for at påvise primær DNA-skade i individuelle celler.
Genotoksicitetsassays hjælper med at vurdere mulighederne for mutationer og kromosomale abnormiteter. Genotoksiner omfatter kemiske stoffer og stråling. Kræftfremkaldende stoffer, mutagener og teratogener er hovedkategorierne af genotoksiner. De forårsager forskellige skader såsom punktmutationer, deletioner, enkelt- og dobbeltstrengede brud, kromosomafvigelser, mikronuclei-formationer, DNA-reparation og cellecyklusinteraktioner. Sådanne tilstande kan føre til en lang række sygdomme, og genotoksicitetsassays forhindrer den potentielle skade fra disse tilstande. Mikronukleusassay og kometassay er to teknikker under genotoksicitetsassays.
Hvad er Micronucleus Assay?
Micronucleus assay er et assay til at vurdere kromosomale skader som følge af mutagen eksponering. Det er vigtigt ved screening af kemikalier, der forårsager spindeldannelse og mikrokerner. Et mikronukleusassay giver information om kemikaliers stabilitet, når det interfererer med kromosomets struktur og funktion. Mange kræftfremkaldende stoffer testes positivt i mikronukleusassays. Analyseprocessen involverer en kemisk behandling og måling af frekvensen af mikronukleerede celler. Hvis der er en unormal stigning i antallet af mikrokerneceller, konkluderer den, at kemikaliet inducerer kromosomale skader.
Et mikronukleusassay udføres norm alt på aktivt delende celler. Derfor er erytrocytter og knoglemarvsstamceller produceret gennem celledeling ideelle kandidater til sådanne assays. De oplever en konstant og hurtig omsætning. Da erytrocytter ikke har nogen ægte kerner, gør det mikronukleerede celler mere synlige i slutningen af assayet.
Figur 01: Mikronukleusanalyseobservation
Micronucleus-assays er økonomiske, hurtigere, bekvemme og kræver færre færdigheder at udføre. De afspejler kromosomafvigelser hurtigt på en pålidelig måde og er yderst nyttige til hurtigt at vurdere kromosomskader. En speciel og alsidig type mikronukleus-assay er cytokinesis block micronucleus cytome (CBMNcyt) assay. Det er den foretrukne analyse til at måle kromosombeskadigelse og ustabilitet i celler. Imidlertid er hovedproblemet ved at bruge mikronukleusassay, at det ikke er i stand til at bestemme forskellige typer kromosomafvigelser, og assayet har indflydelse på mitotisk hastighed og andel af celledød, hvilket får resultaterne til at ændre sig.
Hvad er Comet Assay?
Comet-assay, som også er kendt som enkeltgelelektroforeseassay, er en enkel og følsom teknik til at opdage DNA-skader. Den måler DNA-brud i eukaryote celler og er en standardteknik til biomonitorering og genotoksicitetstestning.
Kometassayet er involveret i indkapslingen af celler i agarosesuspensioner med lavt smeltepunkt, lysis af celler under neutrale eller alkaliske forhold og elektroforese af suspenderede lyserede celler. Under indkapslingsprocessen suspenderes cellerne i smeltet agarose med lavt smeltepunkt, og agarosen danner en matrix af kulhydratfibre for at forankre dem på plads. Agarose er osmotisk neutral; derfor gør det det muligt for opløsningerne at trænge gennem gelen og påvirke cellerne uden at forstyrre og flytte dem. Lyseopløsningen er en højkoncentreret vandig s altopløsning og et rengøringsmiddel. Dette s alt forstyrrer proteiner og bindingsmønstrene i cellen, mens det forstyrrer RNA-indholdet i cellen. Cellerne ødelægger, og alle proteiner, RNA, cytoplasmatiske og nukleoplasmatiske bestanddele, forstyrrer og diffunderer ind i agarosematrixen og efterlader DNA'et.
Figur 02: Comet Assay
Elektroforeseopløsningen er en alkalisk opløsning, hvor DNA-dobbelthelixen denaturerer, og nukleoiden bliver enkeltstrenget. Under denne proces påføres et elektrisk felt til at analysere billederne. Billedanalysen måler den overordnede intensitet af fluorescensen for DNA'et og nukleoidet og sammenligner de to. Den overordnede struktur ligner en komet med et cirkulært hoved svarende til det resterende ubeskadigede DNA og en hale til det beskadigede DNA. Jo lysere og længere halen er på grund af stærkere signaler, jo højere er skadesniveauet.
Hvad er lighederne mellem Micronucleus og Comet Assay?
- Micronucleus og kometanalysen er økonomiske, hurtigere, bekvemme og kræver færre færdigheder.
- De udføres hovedsageligt på DNA.
- Begge analyser hjælper med at vurdere mutationer og kromosomale abnormiteter.
- Desuden bruger begge teknikker kemikalier til at udføre proceduren.
Hvad er forskellen mellem Micronucleus og Comet Assay?
Mikronukleusassayet er vigtigt til kontrol af kromosombeskadigelse som følge af mutageneksponering, mens kometassay er vigtigt til at påvise primær DNA-skade i individuelle celler. Dette er således den vigtigste forskel mellem mikronukleus og kometassay. Mikronukleusassayet er også veletableret til at detektere klastogenicitet og aneugenicitet. Kometassayet bruges som en genotoksicitetstest til at påvise primær DNA-skade i celler. Desuden giver et mikronukleusassay information om kemikaliers stabilitet, mens et kometassay er en enkeltcellet gelelektroforese.
Nedenstående infografik præsenterer forskellene mellem mikronukleus- og kometassay i tabelform til sammenligning side om side.
Opsummering – Micronucleus vs Comet Assay
Genotoksicitetsassays hjælper med at vurdere mulighederne for mutationer og kromosomale abnormiteter. Mikronukleusassay og kometassay er to teknikker under genotoksicitetsassays. Micronucleus assay vurderer kromosomale skader som følge af mutagen eksponering. Comet assay er en enkel og følsom teknik til at opdage DNA-skader. Så dette er den vigtigste forskel mellem mikronukleus og kometassay. Mikronukleusassay er vigtigt ved screening for kemikalier, der forårsager spindeldannelse og mikrokerner. Comet-assay er involveret i indkapslingen af celler i agarosesuspensioner med lavt smeltepunkt, lysis af celler under neutrale eller alkaliske betingelser og elektroforese af suspenderede lyserede celler.
