Nøgleforskellen mellem immunfældning og coimmunudfældning er, at immunfældning er en teknik, der udfælder et protein ud af opløsningen ved hjælp af et specifikt antistof, mens coimmunudfældning er en teknik, der præcipiterer intakte proteinkomplekser ud af opløsningen ved hjælp af et specifikt antistof.
Antigen-antistof-interaktion er en specifik kemisk interaktion mellem antistoffer produceret af B-celler og antigener (proteiner) under en immunreaktion. Norm alt kombineres opløselige antigener med opløselige antistoffer i nærvær af en elektrolyt ved opløselig temperatur og pH for at danne et uopløseligt synligt kompleks. Dette kaldes en udfældningsreaktion. Derfor er immunfældning og co-immunfældning to typer udfældningsreaktioner, der rutinemæssigt bruges i laboratorier til at identificere proteiner såsom antigener.
Hvad er immunpræcipitation?
Immunpræcipitation er en teknik til at udfælde et protein ud af en opløsning ved hjælp af et specifikt antistof. Nogle gange er denne teknik også kendt som individuel proteinimmunpræcipitation. Immunpræcipitation bruger et antistof til at isolere et udvalgt protein af interesse fra cellelysat. Antistoffet oprenser sit specifikke målprotein eller antigen fra en blanding. Antistoffet binder til proteinet, og antistof-antigen-komplekset trækkes ud af prøven. I den eksperimentelle opsætning trækkes antigen-antistofkomplekset ud ved hjælp af protein A/G-koblet agarose eller magnetiske perler. Senere vaskes perlerne, og proteinet af interesse elueres. Det oprensede protein eller antigen opnået ved immunpræcipitation verificeres ved en række forskellige teknikker, såsom enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) og western blot (WB).
Figur 01: Immunpræcipitation
Yderligere kan isolerede proteiner eller antigener kvantificeres og identificeres gennem massespektrometri ved at bruge enzymatiske fordøjelsesmønstre baseret på den primære sekvens. Der er visse overvejelser, før du starter et immunfældningseksperiment: valg af metodeformat, binding af proteiner og perler, valg af det rigtige primære antistof og isotype og negativ kontrol.
Hvad er coimmunudfældning?
Coimmunopræcipitation er en teknik til at udfælde intakte proteinkomplekser ud af opløsningen ved hjælp af et specifikt antistof. Coimmunpræcipitation virker generelt ved at udvælge et specifikt antistof, der retter sig mod et kendt protein (antigen), som menes at være medlem af et større kompleks af proteiner. Ved at målrette det kendte medlem med et specifikt antistof er det muligt at trække hele proteinkomplekset ud af opløsningen. Dette gør det muligt at identificere de ukendte medlemmer af komplekset. Konceptet med at trække proteinkomplekser ud af opløsningen omtales nogle gange som "pull-down"-mekanisme.
Figur 02: B Coimmunopræcipitation
Coimmunoprecipitation er en kraftfuld teknik, der bruges til at analysere protein-protein-interaktioner. Hovedformålet med coimmunpræcipitation er identifikation af interagerende partnere såsom ligander, cofaktorer eller signalmolekyler til proteinet af interesse. Desuden er coimmunpræcipitation en effektiv teknik, der bruges til at adskille proteiner fra serum, cellelysat, homogeniseret væv eller konditionerede medier.
Hvad er lighederne mellem immunpræcipitation og co-immunopræcipitation?
- Immunfældning og co-immunfældning er to typer udfældningsreaktionsbaserede teknikker.
- Begge teknikker kan bruges til at identificere målantigen gennem et specifikt antistof.
- Begge teknikker afhænger stærkt af antigen-antistof-interaktion.
- De bruges rutinemæssigt i kliniske laboratorier.
Hvad er forskellen mellem immunfældning og coimmunudfældning?
Immunudfældning er en teknik, der udfælder et protein ud af opløsningen ved hjælp af et specifikt antistof, mens coimmunudfældning er en teknik, der udfælder intakte proteinkomplekser ud af opløsningen ved hjælp af et specifikt antistof. Dette er således den vigtigste forskel mellem immunfældning og coimmunudfældning. Ydermere er immunpræcipitation mere almindeligt anvendt i laboratorier, mens co-immunpræcipitation ikke almindeligvis anvendes i laboratorier.
Nedenstående infografik præsenterer forskellene mellem immunpræcipitation og coimmunopræcipitation i tabelform til sammenligning side om side.
Opsummering – Immunpræcipitation vs Coimmunoprecipitation
Immunfældning og co-immunfældning er to typer udfældningsreaktionsbaserede teknikker, der afhænger af antigen-antistof-interaktion. Immunpræcipitationsteknikken præcipiterer et protein ud af opløsningen ved hjælp af et specifikt antistof, mens coimmunpræcipitationsteknikken præcipiterer intakte proteinkomplekser ud af opløsningen ved hjælp af et specifikt antistof. Så dette opsummerer forskellen mellem immunpræcipitation og co-immunpræcipitation.
