Nøgleforskellen mellem BL21 og DH5 Alpha er, at BL21 er en protease-deficient, genetisk manipuleret kompetent E. coli-celle, der primært bruges til proteinekspression, mens DH5 Alpha er en genetisk manipuleret kompetent E. coli-celle med recA1-mutation, der primært anvendes. til plasmidtransformation.
E. coli er en af de berømte organismer, der foretrækkes til rekombinant proteinproduktion. Det er blevet den mest populære udtryksplatform gennem årene. Den bruges også som cellefabrik. BL21 og DH5 Alpha er to gensplejsede E. coli-celler, der i øjeblikket anvendes til henholdsvis proteinekspression og plasmidtransformation.
Hvad er BL21?
BL21 er en protease-deficient genetisk manipuleret kompetent E.coli-celle, der primært bruges til proteinekspression. E. coli BL21 er en bakteriecelle afledt af B-stammen. Det har defekter af Lon protease og ompT ydre membran protease. Det bruges almindeligvis til rekombinant proteinekspression, fordi det norm alt bringer stabilitet til udtrykte proteiner. BL21 er nyttig til proteinekspression med pCold I-IV DNA og pCold TF DNA. Men denne kompetente E. coli-celle er ikke beregnet til et proteinekspressionssystem, der anvender T7-promotor, såsom pET-system. Årsagen bag dette er, at BL21 ikke udtrykker T7 RNA-polymerase. Derudover anbefales det ikke at bruge til konstruktion eller fremstilling af plasmid, da det ikke har recA-mutation.
Figur 01: BL21
BL21 blev først beskrevet af Studier i 1986 efter forskellige modifikationer af B-linjen. BL21-celler mangler LON-proteasen, som nedbryder mange fremmede proteiner. Desuden mangler det et andet gen, der koder for den ydre membranprotease (OmpT), hvis funktion er at nedbryde ekstracellulære proteiner. Mangel på disse proteiner udløser den vellykkede produktion af fremmed protein i E. coli BL21-celler. Desuden forhindrer hsdSB-mutation i disse celler fremmed DNA-methylering og forstyrrelse i BL21-cellerne.
Hvad er DH5 Alpha?
DH5 Alpha er en gensplejset kompetent E. coli-celle med recA1-mutation, der primært bruges til plasmidtransformation. DH5 Alpha E. coli-celler er gensplejset af den amerikanske biolog Douglas Hanahan for at maksimere effektiviteten af transformationen. DH5 Alpha-celle har tre forskellige mutationer: recA1, endA1 og lacZΔM15. recA1 er en enkeltpunktsmutation, der erstatter glycin 160 med og en asparaginsyrerest i recA-polypeptidet. Denne mutation deaktiverer aktiviteten af rekombinaserne og inaktiverer homolog rekombination. endA1-mutation inaktiverer en intracellulær endonuklease, som forhindrer den i at nedbryde det indsatte plasmid.
Figur 02: DH5 Alpha
Desuden muliggør lacZΔM15-mutation blå-hvid screening af transformerede celler. Disse celler er kompetente celler. De bruges ofte med calciumchlorid-transformation for at indsætte det ønskede plasmid. Det blev identificeret af nyere forskning, at DH5 Alpha-cellen med Hanahan-metoden var den mest effektive kompetente celle til plasmidtransformation.
Hvad er lighederne mellem BL21 og DH5 Alpha?
- BL21 og DH5 Alpha er to gensplejsede E.coli
- Begge er kompetente celler.
- De består af forskellige mutationer.
- Begge har ingen naturlig habitat.
- Disse bruges til laboratorieformål såsom ekspressionsundersøgelser og kloningsprocedurer.
Hvad er forskellen mellem BL21 og DH5 Alpha?
BL21 er en protease-deficient genetisk manipuleret kompetent E. coli-celle, der primært bruges til proteinekspression. På den anden side er DH5 Alpha en genetisk manipuleret kompetent E. coli-celle med recA1-mutation, der primært anvendes til plasmidtransformation. Så dette er den vigtigste forskel mellem BL21 og DH5 Alpha. Desuden har BL21 E. coli-cellen ikke recA1-mutation, mens DH5 Alpha E. coli-cellen har recA1-mutation.
Den følgende infografik viser forskellene mellem BL21 og DH5 Alpha i tabelform.
Oversigt – BL21 vs DH5 Alpha
De ikke-patogene stammer af E. coli er genetisk udviklet af forskere til laboratorieekspressionsundersøgelser og kloningsformål. BL21 og DH5 Alpha er to gensplejsede E. coli-celler. BL21 bruges primært til proteinekspressionsundersøgelser. På den anden side bruges DH5 Alpha primært til plasmidtransformationsformål. Dette er således opsummeringen af forskellen mellem BL21 og DH5 Alpha.
