Nøgleforskellen mellem radioimmunoassay og immunradiometrisk assay er, at i radioimmunoassay kombineres prøven eller forbindelsen, der skal måles med et radioaktivt antigen før kombinationen, mens prøven eller forbindelsen i det immunradiometriske assay straks kombineres med det radioaktivt mærkede antistoffer.
En immunoassay er en biokemisk test, der detekterer tilstedeværelsen eller koncentrationen af makromolekyler i en opløsning ved hjælp af et antistof eller antigen. Fluorescerende og radioaktive antistoffer bruges til at måle antigener i en prøve. Indledningsvis blev antistoffer brugt i udfældningsteknikker såsom immunpræcipitation, immundiffusion og immunelektroforese til serumproteinanalyse. På nuværende tidspunkt anvendes højfølsomme teknikker såsom radioimmunoassay og immunradiometriske assays til måling af lægemidler, tumormarkører og hormoner.
Hvad er radioimmunoassay?
Radioimmunoassay (RIA) er en immunoassay, der bruger radioaktive elementer trinvis dannelse af antigen-antistofkomplekser. RIA bruger norm alt radioaktive antistoffer til at påvise mængden af antigen i en prøve. RIA er en meget specifik og meget følsom in vitro-analyse. Princippet bag RIA er konkurrencemæssigt bindende. Her konkurrerer et radioaktivt antigen mod et ikke-radioaktivt antigen om en konstant mængde af antistof eller receptorbindingssteder. RIA kræver særlig licens og forholdsregler, da der bruges radioaktive stoffer, og det er fortsat blandt de billigste teknikker.
Figur 01: Immunoassay
Under RIA bliver en kendt mængde antigen ofte gjort radioaktivt ved at mærke det med gamma-radioaktive isotoper af jod knyttet til tyrosin. Derefter kombineres dette antigen med en kendt mængde antistof. Her binder både antigen og antistof sig specifikt til hinanden. Derefter tilsættes en blodserumprøve for at starte en kompetitiv reaktion mellem de mærkede antigener og umærkede antigener i serumet med specifikke antistoffer. I denne reaktion frigiver antistoffer en vis mængde mærket antigen. Denne mængde er proportional med forholdet mellem mærket og umærket antigen. Til sidst genereres en bindingskurve for at udlede mængden af antigen i en patients blodserum.
Hvad er immunradiometrisk assay?
Immunoradiometrisk assay (IRMA) er et immunoassay, der bruger radioaktivt mærkede antistoffer. I IRMA mærkes antistofferne ved hjælp af radioisotoper. Disse antistoffer binder til antigenerne i en specifik prøve. I en positiv prøve binder antistoffer, der er radioaktivt mærket, til antigeners frie epitoper. Dette danner et antigen-antistofkompleks.
Under den anden reaktion fjernes de mærkede antistoffer, der er ubundne, ved hjælp af et fastfase-antigen. Det resterende antal radioaktive antistoffer i opløsningen er en direkte funktion af antigenkoncentrationen. IRMA er kendt som en overskydende reagensanalyse, hvor en overskydende mængde af radioaktivt mærket antistof anvendes som reagens. Her får en overskydende koncentration af mærket antistof eller antigen lov til at reagere. Som det sidste trin adskilles de antigenbundne og frie antistoffer, og den antigenbundne fraktion udsættes for radioaktive assays. Her er fraktionens aktivitet direkte proportional med koncentrationen af antigenet.
Hvad er lighederne mellem radioimmunoassay og immunradiometrisk assay?
- Både radioimmunoassay og immunradiometrisk assay er immunoassays, der bruger radioaktive elementer i den trinvise dannelse af antigen-antistofkomplekser.
- De danner et antigen-antistofkompleks.
Hvad er forskellen mellem radioimmunoassay og immunradiometrisk assay?
Radioimmunoassay er en immunoassay, der bestemmer antistofniveauer af et antigen mærket med en radioisotop, mens immunradiometrisk assay er en overskydende reagensanalyse, der bruger en overskydende koncentration af radiomærket antistof. Dette er således den vigtigste forskel mellem radioimmunoassay og immunradiometrisk assay. IRMA er i stand til at give højere følsomhed end RIA. I RIA er antigener mærket med gamma-radioaktive isotoper af jod, mens antistoffer i IRMA er mærket ved hjælp af isotoper af jod. Så dette er også en forskel mellem radioimmunoassay og immunradiometrisk assay. Da IRMA er en overskydende reagensteknik, udføres analysen på kortere tid end RIA.
Den følgende tabel opsummerer forskellene mellem radioimmunoassay og immunradiometrisk assay.
Opsummering – Radioimmunoassay vs immunradiometrisk assay
Radioimmunoassay er en immunoassay, der bruger radioaktive elementer i trinvis dannelse til at bestemme antistofniveauer. RIA bruger norm alt radioaktive antistoffer. Et radioaktivt antigen konkurrerer mod et ikke-radioaktivt antigen om en konstant mængde af antistof eller receptorbindingssteder. Det immunradiometriske assay er et immunoassay, der udføres for at bestemme antigenniveauer i en prøve under anvendelse af radiomærkede antistoffer. Disse antistoffer binder til antigener til stede i en specifik prøve. Ved afslutningen af hvert assay dannes et antigen-antistofkompleks. For at opnå resultaterne af analyserne tegnes en bindingskurve. I radioimmunoassay er den mærkede antigenmængde proportional med forholdet mellem mærket og umærket antigen, men i et immunradiometrisk assay er aktiviteten af den antigenbundne fraktion direkte proportional med koncentrationen af antigenet. Dette er opsummeringen af forskellen mellem radioimmunoassay og immunradiometrisk assay.
