Nøgleforskellen mellem BCA og Bradford assay er, at BCA assay er tidskrævende og mindre nøjagtig, hvorimod Bradford assay er hurtig og præcis.
BCA og Bradford assay er to assaymetoder til bestemmelse af proteinkoncentration. Disse to assays har forskellige assayprincipper og forskelle i deres nøjagtighed.
Hvad er BCA-analyse?
BCA-assay eller bicinchoninsyre-assay er et biokemisk assay, der er nyttigt til at bestemme den totale koncentration af protein i en opløsning. Denne metode er også opkaldt som Smith-assay efter dens opfinder, Paul K. Smith. Denne analysemetode viser ligheder med Lowry-proteinassay, Bradford-proteinassay eller biuretreagens. Vi kan observere den totale proteinkoncentration i en given prøve gennem en farveændring af prøveopløsningen, som går fra grøn til lilla. Denne farveændring sker i forhold til proteinindholdet. Derefter kan vi bruge en kolorimetrisk teknik til at analysere farveintensiteten og proteinindholdet i prøven.
BCA-metode til proteinestimering
Når man overvejer mekanismen for BCA-assay, indeholder den typiske BCA-opløsning en meget alkalisk opløsning med en pH-værdi på næsten ca. 11,25, og ingredienserne i denne opløsning omfatter bicinchoninsyre, natriumcarbonat, natriumbicarbonat, natriumtartrat og kobber(II)sulfatpentahydrat. Denne analyse afhænger primært af to kemiske reaktioner: reduktionen af kobber(II) til kobber(I) af peptidbindingerne i protein og chelering af to molekyler bicinchoninsyre med kobber(I)-ion, hvilket resulterer i et lilla farvet kompleks, der kan absorbere lys ved 562 nm bølgelængde. I den første reaktion er mængden af kobber(II) reduceret af peptidbindinger proportional med mængden af protein i prøven.
Hvad er Bradford Assay?
Bradford-assay er en spektroskopisk analysemetode, der er nyttig til at måle koncentrationen af protein i en opløsning. Denne metode blev udviklet af Marion M. Bradford i 1976, og det er en forholdsvis hurtig og præcis metode.
Farvereaktion af protein og Bradford-reagens
Vi kan bruge denne metode til at bestemme koncentrationen af proteinmængden i en prøve. Den kemiske reaktion, der finder sted i prøven under dette assay, er udelukkende afhængig af aminosyresammensætningen af proteinet i prøven.
Bradford Method of Protein Estimation
Når man overvejer metoden til dette assay, er det et kolorimetrisk proteinassay, der er baseret på absorbansskiftet af farvestoffet ved navn Coomassie Brilliant Blue G-250. Generelt findes dette farvestof i tre former som anionisk (blå) form, neutral (grøn) form og kationisk (rød) form. Derfor ændrer farvestoffet under sure forhold sin farve fra rød til blå. Dette er på grund af proteinets binding med farvestoffet. Hvis der derimod ikke er noget protein at binde med farvestoffet, kommer farveændringen ikke til syne, opløsningen får en rødbrun farve. Dette farvestof er i stand til at danne et stærkt, ikke-kovalent kompleks med carboxylgruppen i proteinet gennem Van der Waal-kræfter og elektrostatiske tiltrækninger.
Hvad er forskellen mellem BCA og Bradford Assay?
BCA og Bradford assay er to assaymetoder til bestemmelse af proteinkoncentration. Disse to assays har forskellige assayprincipper og forskelle i deres nøjagtighed. Den vigtigste forskel mellem BCA og Bradford assay er, at BCA assay er tidskrævende og mindre nøjagtig, mens Bradford assay er hurtig og præcis.
Den følgende infografik opsummerer forskellene mellem BCA og Bradford assay i tabelform.
Opsummering – BCA vs Bradford Assay
BCA-assay eller bicinchoninsyre-assay er et biokemisk assay, der er nyttigt til at bestemme den totale koncentration af protein i en opløsning. Bradford-assay er en spektroskopisk analysemetode, der er nyttig til at måle koncentrationen af protein i en opløsning. Den vigtigste forskel mellem BCA og Bradford assay er, at BCA er tidskrævende og mindre nøjagtig, hvorimod Bradford assay er hurtig og præcis.
