Nøgleforskellen mellem Bradford- og Lowry-proteinassay er, at Bradford-proteinassay er baseret på absorbansskiftet af farvestoffet Coomassie brilliant blue G-250, mens Lowry-proteinassay er baseret på reaktionen af kobberioner (Cu+) ioner produceret ved oxidation af peptidbindinger med Folin-Cioc alteu-reagens.
En analyse er en analytisk teknik, der hjælper med at karakterisere de vigtigste funktionelle komponenter i en prøve. Derfor kan et assay enten være en kvalitativ eller kvantitativ test. Mange områder, herunder laboratoriemedicin, farmakologi, miljøbiologi, molekylærbiologi, biokemi og immunologi, bruger denne form for analyser rutinemæssigt. Bradford og Lowry proteinassay er to biokemiske assays, der bestemmer proteinkoncentrationen i en prøveopløsning. Begge analyser bruger kolorimetriske teknikker til at give resultater.
Hvad er Bradford Protein Assay?
Bradford proteinanalyse er en hurtig spektroskopisk analytisk procedure til proteinanalyse. Det viser høj nøjagtighed ved måling af proteinkoncentrationen i en opløsning. Marion Bradford introducerede denne procedure i 1976. I dette assay er den samlede reaktion baseret på aminosyresammensætningen af de målte proteiner. Med andre udtryk er Bradford-proteinassay et kolorimetrisk assay. Den bruger farvestoffet Coomassie brilliant blue. Derfor afhænger denne kolorimetriske proteinanalyse af farvestoffets absorbansforskydning. Coomassie brilliant blue G-250 findes i tre formater: kationisk (rød), anionisk (blå) og neutral (grøn). Under sure forhold bliver den røde form af farvestoffet omdannet til blå. Det bekræfter bindingen af proteinet. Hvis proteinet ikke er til stede, kan opløsningen forblive i brun farve.
Figur 01: Bradford-proteinassay
Bradford-proteinassay adskiller sig fra andre proteinassays, da det er mindre modtageligt for interferens fra forskellige kemiske forbindelser, der er til stede i proteinopløsningen. Disse forbindelser omfatter natrium, kalium, glucose og saccharose osv.
Hvad er Lowry Protein Assay?
Lowry-proteinassay er et biokemisk assay, der bruges til at bestemme det totale niveau af protein i en opløsning. Oliver H. Lowry er den person, der udviklede dette reagens i 1940. Fremgangsmåden afbilder opløsningens samlede proteinkoncentration ved en farveændring, der er proportional med proteinkoncentrationen i opløsningen. Derfor er dette også en kolorimetrisk proteinanalyse.
Reaktionen mellem kobberioner (Cu+) produceret ved oxidation af peptidbindinger og Folin-Cioc alteu-reagens er grundlaget for denne procedure. Også dette reagens indeholder phosphomolybdinsyre og phosphor-wolframsyre. Imidlertid er reaktionsmekanismen for Lowry-proteinassay ikke godt forstået. Men det involverer oxidation af cystein-, tryptofan- og tyrosinrester ved reduktion af Folin-Cioc alteu-reagens.
Figur 02: Lowry-proteinassay
Cysteinresterne bidrager til absorbansen observeret i Lowry-proteinassay, og reaktionen resulterer i et strålende blåt molekyle; heteropoly molybdæn blå. Reduktionen af dette molekyle måles ved absorbans ved 660 nm. Koncentrationen af cystein- og tryptofanrester, der reducerede Folin-Cioc alteu-reagenset, udleder derfor den totale koncentration af proteinet i opløsningen.
Hvad er lighederne mellem Bradford og Lowry Protein Assay?
- Bradford og Lowry proteinanalyser bestemmer proteinkoncentrationen i en opløsning.
- Begge metoder er kolorimetriske metoder.
- Følsomheden af begge metoder er også høj.
Hvad er forskellen mellem Bradford og Lowry Protein Assay?
Bradford- og Lowry-proteinassay er to typer assays, der bestemmer proteinkoncentrationen i en opløsning. Bradford-proteinanalysen er afhængig af absorbansskiftet af farvestoffet Coomassie brilliant blue G-250, mens Lowry-proteinanalysen afhænger af reaktionen af kobberioner produceret ved oxidation af peptidbindinger med Folin-Cioc alteu-reagens. Så dette er den vigtigste forskel mellem Bradford og Lowry proteinanalyse. Bradford proteinanalyse tager 15 minutter at producere et resultat, mens Lowery proteinanalyse tager 40-60 minutter at producere et resultat. Dette er således en anden forskel mellem Bradford og Lowry proteinanalyse. Desuden er Bradford proteinassay afhængig af aminosyresammensætningen, mens Lowry proteinassay er delvist afhængig af aminosyresammensætningen. Derfor er dette også en forskel mellem Bradford og Lowry proteinanalyse.
Below inforaphic giver flere detaljer om forskellen mellem Bradford og Lowry proteinanalyse.
Opsummering – Bradford vs Lowry Protein Assay
En analyse er en analytisk teknik, der bruges til at karakterisere den vigtigste funktionelle komponent i en prøve. Bradford og Lowry proteinassay er to typer proteinassays, der fungerer under kolorimetriske teknikker. Både Bradford- og Lowry-proteinassays bestemmer proteinkoncentrationen i en opløsning. Den vigtigste forskel mellem Bradford og Lowry Protein Assay ligger dog i den kolorimetriske teknik, de bruger. Bradford-proteinanalysen bruger Coomassie brilliant blue G-250, mens Lowry-proteinanalysen bruger kobberioner (Cu+)-ioner og Folin-Cioc alteu-reagens. Desuden giver Bradford-metoden hurtige resultater end Lowry-proteinassay. Begge metoder er dog meget følsomme metoder og er udsat for interferens fra forskellige stoffer.
