Transformation vs Transfection
Transformation og transfektion er to simple teknikker, der bruges til at introducere et fremmed gen i en værtscelle. Disse teknikker afhænger dog af typen af værts- eller vektorsystemer.
Hvad er celletransformation?
Transformation er den teknik, der bruges til at introducere gener i gær- og bakterieceller. Denne teknik forårsager norm alt arvelige ændringer i gener, og dermed er genets ekspression permanent. Bakterietransformationen blev først introduceret i 1928 af Frederick Griffith. Så i begyndelsen af 1970'erne blev denne teknik brugt i E.coli. Under processen med transformation af E. coli gennemblødes cellerne i iskold opløsning af CaCl2 Dette trin gør E.coli-celler kompetente. Derefter blandes de kompetente celler med plasmid-DNA'et og inkuberes på is i 20-30 min. Derefter gives et kort varmechok for at muliggøre overførsel af DNA ind i cellen. Til sidst placeres cellerne i en næringsbouillon og inkuberes ved 37 °C i 60-90 minutter for at etablere plasmiderne. Når disse trin er gennemført med succes, kan de transformerede celler placeres på et egnet medium til formering af celler. Da transformation betragtes som en ineffektiv teknik, må den ikke bruges til klargøring af klonbanker.
Hvad er celletransfektion?
Transfektion er en metode til indføring af et fremmed gen, sædvanligvis, i pattedyrsceller. Der er to metoder til transfektion; nemlig forbigående transfektion og stabil transfektion. Ved forbigående transfektion er genekspression tilgængelig i en begrænset periode; således forårsager ændringen af genet midlertidig ekspression. Denne transfektionsmetode er enkel og hurtig; derfor kan den bruges rutinemæssigt. En ulempe ved forbigående transfektion er vanskeligheden ved at anvende til proteinsyntesesystemer i stor skala.
Under stabil transfektion integreres et målgen i værtscellens genom, og dermed er genekspressionen permanent i modsætning til den forbigående transfektion.
Hvad er forskellen mellem transformation og transfektion?
• Transformation er introduktionen af et gen i en prokaryot celle (bakteriel og gær), hvorimod transfektion norm alt kaldes introduktionen af et gen i en pattedyrscelle.
• Transformation resulterer i arvelig ændring i gener, hvorimod transfektion kan resultere i enten midlertidig ekspression eller permanente ændringer i gener.
