Nøgleforskellen mellem gær en hybrid og gær to hybrid er, at gær en hybrid er et in vitro-baseret assay til at analysere DNA-protein-interaktioner, mens gær to-hybrid er et in vitro-baseret assay til at analysere protein-protein-interaktioner.
At studere interaktionerne mellem cellulære molekyler kan hjælpe med at definere genkendelsessteder involveret i genekspression og proteinveje. DNA- og proteininteraktioner er integrerede i cellulære processer såsom DNA-modifikationer og transkriptionel regulering osv. På den anden side spiller protein- og proteininteraktioner vitale roller i cellulære processer såsom replikation, transkription, translation og sign altransduktion. Derfor er det kritisk vigtigt at identificere disse interaktioner af cellulære molekyler gennem forskellige assays. Gær en hybrid og gær to hybrid er to in vitro-baserede assays til at analysere DNA-protein- og protein-protein-interaktioner.
Hvad er Yeast One Hybrid?
Gær en hybrid (Y1H) er et in vitro-baseret assay til at analysere intracellulære DNA-protein-interaktioner. Denne metode blev først etableret af Wang og Reed i 1993. Siden da har den vist en større magt i biologisk forskning. I denne analyse er der to hovedkomponenter: DNA lokkemad og proteinbytte.
Figur 01: Yeast One Hybrid
I proceduren klones en DNA-sekvens (DNA lokkemad) først opstrøms for to forskellige reportere (HIS3, LacZ). Disse reporterkonstruktioner er integreret i genomet af en gærstamme. Transkriptionsfaktorer tages som proteinbytte. Transkriptionelle faktorer fusioneres til det transkriptionelle aktiveringsdomæne (AD) af gær Gal4 transkriptionsfaktor for at fremstille hybridproteiner. Hele dette hybridprotein integreres i et plasmid, før det introduceres i gærstammen. Efter introduktionen af det rekombinante plasmid, når transkriptionsfaktoren interagerer med DNA-fragmentet, aktiverer AD-delen reportergenekspressionen (HIS3 eller LacZ). Sekventering af plasmiderne muliggør identifikation af den transkriptionelle faktor, der kan binde til DNA-fragmentet. For nylig blev gær en hybridmetode brugt til at forske i sygdomsdiagnose. Derfor vil denne analyse i fremtiden blive mere udbredt i videnskabelig forskning og medicinske behandlinger.
Hvad er Yeast Two Hybrid?
Gær to-hybrid (Y2H) er et in vitro-baseret assay til at analysere intracellulære protein- og proteininteraktioner. Denne metode blev oprindeligt fundet af Stanley Fields og Ok-Kyu Song i 1989. Denne teknik detekterer protein-protein-interaktioner ved hjælp af Gal4-transskriptionsfaktoren af gæren.
Figur 02: Yeast Two Hybrid
I denne metode konstrueres to fusioner (hybrider) først ved hjælp af proteiner af interesse: fusion af et protein med DNA-bindingsdomæne (DBD) og ved at fusionere det andet protein med aktivatordomænet (AD) af Gal4-transkriptionsfaktoren. Proteinet fusioneret med DBD er kendt som lokkemad, mens proteinet fusioneret med AD er kendt som bytte. I gærstammen bringes DBD og AD ved vekselvirkning mellem lokkemad og bytte i tæt nærhed for at generere en funktionel Gal4-transkriptionsfaktor opstrøms for reportergenet. Den funktionelle transkriptionsfaktor aktiverer reportergenekspression. Desuden bruges denne metode i øjeblikket til at screene interaktionerne af integrerede membranproteiner i pattedyrsceller.
Hvad er lighederne mellem Gær One Hybrid og Yeast Two Hybrid?
- Gær en hybrid og gær to hybrid er to in vitro-baserede assays til at analysere DNA-protein- og protein-protein-interaktioner.
- Disse analyser bruger gærstammer.
- Begge assays bruger aktiveringsdomænet (AD) for Gal4-transskriptionsfaktoren.
- De bruger udtryk for reportergen (HIS3 eller LacZ) til at detektere interaktioner.
- De har lokkemad og bytte.
- Begge analyser er yderst nyttige i moderne biologisk forskning.
Hvad er forskellen mellem Gær One Hybrid og Yeast Two Hybrid?
Gær en hybrid er en in vitro-baseret analyse til at analysere DNA- og proteininteraktioner, mens gær to-hybrid er en in vitro-baseret assay til at analysere protein- og proteininteraktioner. Dette er således den vigtigste forskel mellem gær en hybrid og gær to hybrid. Ydermere, i en hybrid af gær, er lokkemad et DNA-fragment, og bytte er et proteinmolekyle. På den anden side er både agn og bytte i gær to hybrider proteinmolekyler.
Nedenstående infografik viser forskellene mellem gær en hybrid og gær to hybrid i tabelform til sammenligning side om side.
Opsummering – Gær One Hybrid vs Yeast Two Hybrid
Gær en hybrid og gær to hybrid er to vigtige in vitro-baserede assays. Gær en hybrid er et in vitro-baseret assay til at analysere DNA- og proteininteraktioner, mens gær to-hybrid er et in vitro-baseret assay til at analysere protein- og proteininteraktioner. Dette er således den vigtigste forskel mellem gær en hybrid og gær to hybrid.
