Nøgleforskel – immunfluorescens vs immunhistokemi
Sygdomsdiagnostik, som bruger molekylærbiologiske metoder, er blevet et voksende område af den kliniske laboratorieteknologi. Den omfatter alle test og metoder til at identificere en sygdom og forstå årsagen til en sygdom ved at analysere DNA, RNA eller udtrykte proteiner i en organisme. Hurtige fremskridt inden for molekylær diagnostik har muliggjort grundforskning i overførbare og ikke-smitsomme sygdomme. Disse bruges til at bestemme ændringer i sekvens eller ekspressionsniveauer i vigtige gener eller proteiner involveret i sygdom. Immunofluorescens (IF) og Immunohistokemi (IHC) er to sådanne meget udbredte teknikker i cancerbiologi. IF er en type IHC, hvor en fluorescensdetektionsmetode bruges til at analysere monoklonale og polyklonale antistoffer, hvorimod IHC bruger kemisk baserede metoder til at detektere de monoklonale og polyklonale antistoffer. Dette er den vigtigste forskel mellem IF og IHC.
Hvad er immunfluorescens (IF)?
Immunofluorescens er en detektionsteknik, hvor de antistoffer, der anvendes i assayet, er mærket med fluorescerende farvestoffer eller fluorescerende proteiner til detektionsformålet. Mærkede sekundære antistoffer kan resultere i uønskede baggrundssignaler; derfor er IF-teknikken baseret på at mærke selve det primære antistof på nuværende tidspunkt for at undgå uønskede signaler under detektion. Gennem denne teknik forhindres ikke-specifik binding mellem det primære og sekundære antistof, og det er hurtigere, da der ikke er noget sekundært inkubationstrin involveret. Datakvaliteten er også forbedret.
Figur 01: Dobbelt immunfluorescensfarvning for BrdU, NeuN og GFAP
Fluorochromer eller fluorescerende farvestoffer er forbindelser, der kan absorbere stråling, helst ultraviolet stråling, der exciteres. Når partiklerne når grundtilstanden fra den exciterede tilstand, udsender de stråling, som opfanges og detekteres af en detektor for at danne et spektrum. Det er af stor betydning, at det fluorescerende mærke er kompatibelt og stabilt for den særlige reaktion, og det bør være korrekt konjugeret til antistoffet for at opnå nøjagtige resultater. En af de mest anvendte fluorochromer er fluorescein isothiocyanat (FITC), som er af grøn farve, med absorptions- og emissionsspidsbølgelængder på henholdsvis 490 nm og 520 nm. Rhodamin, et andet middel, der anvendes i IF, er rød i farven og har distinkte absorptions- og emissionsspidsbølgelængder på 553 nm og 627 nm.
Hvad er immunhistokemi (IHC)?
IHC er en molekylær testmetode, der praktiseres for at identificere og bekræfte tilstedeværelsen af antigenet i målcellen. Målcellen kunne være en infektiøs partikel, et mikrobielt patogen eller en ondartet tumorcelle. IHC anvender monoklonale og polyklonale antistoffer til at bestemme tilstedeværelsen af antigener til stede på celleoverfladen af målcellerne. Teknikken er baseret på antigen-antistofbinding. En detektionsmarkør er konjugeret til disse antistoffer for at påvise tilstedeværelsen eller fraværet af det særlige antigen. Disse markører kan være kemiske markører såsom enzymer, fluorescensmærkede antistoffer eller radiomærkede antistoffer.
Figur 02: Muse-hjerne-skive farvet med immunhistokemi
Den mest populære anvendelse af IHC er i cancercellebiologi til at identificere tilstedeværelsen af ondartede tumorer, men den bruges også til påvisning af infektionssygdomme.
Hvad er lighederne mellem immunfluorescens og immunhistokemi?
- Immunofluorescens og immunhistokemi finder sted under in vitro-betingelser.
- Begge teknikker er baseret på antigen-antistoffet
- Begge er meget hurtige teknikker.
- Resultater af teknikkerne er reproducerbare.
- Begge har forbedret datakvalitet.
- Disse teknikker, der bruges til diagnostik af cancer og infektionssygdomme.
Hvad er forskellen mellem immunfluorescens og immunhistokemi?
Immunofluorescens vs Immunohistokemi |
|
| IF er en detektionsteknik, hvor de antistoffer, der anvendes i analysen, mærkes ved hjælp af fluorescerende farvestoffer eller fluorescerende proteiner til detektion. | IHC er en detektionsteknik, hvor de antistoffer, der anvendes i assayet, er mærket ved hjælp af kemikalier eller radioaktive elementer til detektion. |
| Nøjagtighed | |
| Nøjagtigheden er højere i IF-teknik sammenlignet med IHC. | Nøjagtigheden er lavere i IHC. |
| Specificity | |
| IF er mere specifik. | IHC er mindre specifik. |
Opsummering – Immunfluorescens vs immunhistokemi
Molekylære mekanismer har medført mange ændringer inden for medicin, hvilket har givet anledning til avancerede molekylære testmetoder, som har medført revolutioner inden for diagnostik. Disse opfindelser har ført til en hurtig og nøjagtig identifikation og bekræftelse af sygdommen, hvilket muliggør en vellykket administration og produktion af lægemidler. Disse teknikker bruges også i farmakologi for at finde lægemidlers mål og bekræfte lægemidlets farmakokinetiske egenskaber under lægemiddelmetabolisme. IF og IHC er to diagnostiske metoder, der er baseret på konceptet antigen- og antistofbinding, selvom påvisningsmåden i begge teknikker er forskellig. IF bruger princippet om fluorescens til at detektere antigenet, og IHC bruger konceptet med kemisk konjugation til at detektere antigenet. Dette er forskellen mellem IF og IHC.
Download PDF-version af immunfluorescens vs immunhistokemi
Du kan downloade PDF-versionen af denne artikel og bruge den til offline-formål i henhold til citatnotat. Download venligst PDF-versionen her Forskel mellem immunfluorescens og immunhistokemi.
