Nøgleforskel – In situ-hybridisering vs immunhistokemi
Kræft- og infektionssygdomsdiagnostik er en populær trend, hvor nye proteomik- og genomikbaserede teknikker bruges med det formål at identificere tumorer eller infektiøse celler, deres spredning og steder for celleudvikling og analysere det genetiske grundlag for de fleste overførbare og ikke-smitsomme sygdomme. Dette vil resultere i nøjagtig lægemiddelbehandling og -design og i udvikling af skræddersyede terapier til sygdomme. In situ hybridisering (ISH) og Immunohistochemistry (IHC) er to så vidt anvendte teknikker inden for cancerbiologi, og den vigtigste forskel mellem in situ hybridisering og immunkemi ligger i de molekyler, der bruges i analyseproceduren. I ISH bruges nukleinsyreproberne til analyse, mens der i IHC anvendes monoklonale og polyklonale antistoffer til de diagnostiske bestemmelser.
Hvad er In Situ Hybridization (ISH)?
In situ hybridisering er en nukleinsyrehybridiseringsteknik, som udføres direkte på en del eller et afsnit af væv, i hele vævet eller i celler. Teknikken afhænger af teorien om Watson Cricks komplementære baseparring, hvilket resulterer i enten DNA-DNA-hybrider eller DNA-RNA-hybrider, som kan detektere muterede gener eller identificere det nødvendige gen af interesse. Enkeltstrengede DNA-sekvenser, dobbeltstrengede DNA-sekvenser, enkeltstrengede RNA-sekvenser eller syntetiske oligonukleotidsekvenser bruges som prober under hybridiseringsteknik, og disse prober mærkes med radioaktivt fosfor i dets 5'-ende til identifikationsprocedurer ved autoradiografi eller mærkes med fluorescerende farvestoffer. Der er forskellige typer ISH-teknikker tilgængelige baseret på den anvendte type sonde og typen af visualiseringsteknik, der følges.
Figur 01: Fluorescerende in situ-hybridisering
Der er mange anvendelser af ISH, hovedsageligt inden for molekylær diagnostik af infektionssygdomme for at identificere tilstedeværelsen af patogener og bekræfte patogenet via molekylær diagnostik. Det bruges også inden for udviklingsbiologi, karyotyping og fylogenetisk analyse og fysisk kortlægning af kromosomer.
Hvad er immunhistokemi (IHC)?
I IHC-teknikken er det primære molekyle, der analyseres, antigenet. Under IHC anvendes monoklonale og polyklonale antistoffer til at bestemme tilstedeværelsen af antigener efter infektion eller malign celleproliferationsstatus. Teknikken er baseret på antigen-antistof-binding, og enzymmærker anvendes til denne teknik; en sådan anvendelse er ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay). Markørerne kan også være fluorescerende mærkede antistoffer eller radiomærkede antistoffer.
Figur 02: Immunhistokemi
IHC er meget brugt til påvisning af kræftceller. De diagnostiske procedurer retter sig mod de antigener, der er til stede på tumorcellerne, for at identificere og karakterisere tumoren. Den samme procedure er indarbejdet til at diagnosticere smitsomme stoffer. Monoklonale og polyklonale antistoffer bruges også til at analysere forskellige genprodukter ved at aktivere antistof-antigen-bindingsreaktionen mellem det ønskede protein og det syntetiske antistof, der administreres.
Hvad er lighederne mellem in situ-hybridisering og immunhistokemi?
- ISH og IHC er meget specifikke reaktioner.
- Begge teknikker er meget nøjagtige.
- Begge teknikker kan bruges i diagnostik for kræft og infektionssygdomme.
- Disse teknikker udføres i sterile in vitro-miljøer.
- Begge er hurtige teknikker, der giver reproducerbare resultater.
- ISH og IHC bruger detektionsmetoder såsom radiomærkning og fluorescensteknikker.
Hvad er forskellen mellem in situ-hybridisering og immunhistokemi?
In situ-hybridisering vs immunhistokemi |
|
| ISH er en nukleinsyrehybridiseringsteknik, som udføres direkte på en del eller en del af vævet eller hele vævet. | IHC er en teknik, hvor monoklonale og polyklonale antistoffer bruges til at bestemme tilstedeværelsen af antigener, som er specielle proteinmarkører placeret på celleoverfladerne. |
| Type af analyserede biomolekyler | |
| ISH analyserer nukleinsyrer. | IHC analyserer proteiner-antigener. |
| Basis for biokemisk reaktion | |
| Komplementær baseparring mellem DNA-DNA eller DNA-RNA forekommer i denne teknik. | Antigen-antistof-interaktioner er involveret i immunhistokemi. |
| Enzym-Linked Detection Methods | |
| Enzym-linked detektionsmetoder kan ikke bruges i ISH. | Enzym-linked detektionsmetoder kan bruges i IHC. |
Opsummering – In situ hybridisering vs immunhistokemi
Molekylær diagnostik er hurtige og bekræftende metoder, der kan bruges til at identificere en ikke-smitsom sygdom såsom kræft eller overførbar sygdom såsom HIV eller tuberkulose baseret på de molekylære markører, der er til stede på cellerne, som fører til manifestationen af sygdommen. Molekylære markører kan være til stede i form af udtrykte proteiner eller på det genetiske niveau baseret på hvilket forskellige nye teknikker introduceres for at øge effektiviteten og er mindre besværlige, selvom der er en høj pris forbundet med disse teknikker. Således afhænger ISH af DNA-DNA eller DNA-RNA hybriddannelse, og IHC afhænger af de specifikke reaktioner mellem antistof og antigen. Dette er forskellen mellem in situ hybridisering.
Download PDF-version af In Situ Hybridization vs Immunohistochemistry
Du kan downloade PDF-versionen af denne artikel og bruge den til offline-formål i henhold til citatnotat. Download venligst PDF-version her. Forskel mellem in situ hybridisering og immunhistokemi.
