Nøgleforskel – HPLC vs LCMS
Lad os først se på betydningen af HPLC og LCMS, før vi analyserer forskellen mellem HPLC og LCMS. Kromatografi er en separationsteknik i kemisk analyse, hvor prøvebestanddele adskilles under passage gennem et kromatografisk medium. Det involverer også interaktion med prøven, den stationære fase og den mobile fase. HPLC står for High Performance Liquid Chromatography, og det bruges som en væskekromatografimetode i analytisk kemi. Kombinationen af væskekromatografi og massespektroskopi (LCMS) er udviklet til kvantitativ analyse af udvalgte biomolekyler, og det er en meget følsom, nøjagtig og specifik analyseprocedure sammenlignet med HPLC. Dette er den vigtigste forskel mellem HPLC og LCMC. Denne artikel vil introducere dig til HPLC og LCMC, der beskæftiger sig med kemisk analyse og diskuterer forskellene mellem HPLC og LCMS.
Hvad er HPLC?
High-performance væskekromatografi (HPLC) er en populær separationsteknik inden for analytisk kemi. Det bruges hovedsageligt til at adskille komponenterne, til at identificere og kvantificere hver komponent i en blanding. Tidligere var denne metode kendt som højtryksvæskekromatografi, fordi den afhang af pumper til at strømme et tryksat flydende opløsningsmiddel omfattende prøveblandingen gennem en søjle pakket med et fast adsorberende materiale. Hver eneste bestanddel i prøveblandingen interagerer forskelligt med det faste adsorberende materiale, hvilket resulterer i forskellige strømningshastigheder for forskellige bestanddele. Dette kan føre til adskillelse af bestanddelene, når de flyder ud af HPLC-søjlen.
HPLC er blevet brugt til forskellige applikationer såsom analyse af D-vitamin-niveauer i blod, ulovligt stofbrug af atleter ved at detektere medicinrester i deres urin, sortering af bestanddelene i en kompleks biologisk prøve til forskningsformål og analyse og fremstilling af lægemidler.
Hvad er LCMS?
Væskekromatografi–massespektrometri (LCMS) er en analytisk teknik, der kombinerer væskekromatografiens fysiske adskillelsesevner med masseanalyseevnen ved massespektrometri (MS). Væskekromatografi er en separationsteknik, og massespektrometri bruges til at analysere masse-til-ladning-forholdet mellem ladede partikler. Den fysiske adskillelse opnås norm alt ved HPLC og alternativt LCMS også kendt som HPLC-MS. LCMS er en dominerende analytisk teknik, der har en meget høj nøjagtighed, følsomhed og specificitet sammenlignet med HPLC. Det er således nyttigt i mange applikationer såsom forskningsformål, lægemiddelanalyse, fødevareanalyse osv. LCMS bruges hovedsageligt til at adskille, detektere, identificere og kvantificere biokemiske egenskaber af en bestemt prøve i nærværelse af komplekse kemiske blandinger.
Hvad er forskellen mellem HPLC og LCMC?
Akronym og definition af HPLC og LCMC
HPLC: HPLC står for High-Performance Liquid Chromatography. Det er en separationsteknik, der hovedsageligt bruges til at adskille komponenterne, til at identificere og kvantificere hver komponent i en blanding.
LCMS: LCMS står for Liquid Chromatography and Mass Spectrometry. Det er en analytisk teknik, der kombinerer væskekromatografiens fysiske separationsevner med massespektrometriens (MS) masseanalyseevne.
Karakteristika for HPLC og LCMC
Klassificering
HPLC: Dette er kun en væskekromatografimetode.
LCMS: Dette er en kombination af væskekromatografimetoden og massespektrometrimetoden.
Effektivitet
HPLC: Sammenlignet med LCMS er HPLC-analysen mindre effektiv og langsommere.
LCMS: Sammenlignet med HPLC er LCMS-analysen effektiv og hurtigere.
Følsomhed
HPLC: Sammenlignet med LCMS er HPLC-analysen mindre følsom.
LCMS: Sammenlignet med HPLC er LCMS-analysen mere følsom.
Specificity
HPLC: Sammenlignet med LCMS er HPLC-analysen mindre specifik.
LCMS: Sammenlignet med HPLC er LCMS-analysen mere specifik.
Nøjagtighed
HPLC: HPLC giver mindre nøjagtige resultater end LCMS til bestemmelse af nogle kemikalier.
LCMS: LCMS giver mere nøjagtige resultater end HPLC til bestemmelse af nogle kemikalier.
Component
HPLC: HPLC kan betragtes som en komponent af LCMS.
LCMS: LCMS kan ikke betragtes som en komponent af HPLC.
Ionkilde
HPLC: Ionkilde findes ikke i HPLC-instrumentet.
LCMS: Ionkilde er til stede i LCMS-instrumentet.
Applications
HPLC: Ioner, polymerer, organiske molekyler og biomolekyler kan analyseres ved hjælp af HPLC.
LCMS: Organiske molekyler og biomolekyler kan analyseres. I modsætning til HPLC kan LCMS bruges til at undersøge ufuldstændigt opløste blandinger.
Operation
HPLC: Diagrammet for et HPLC-instrument er givet i figur 1, og det inkluderer norm alt en autosampler, pumper og en detektor. Prøvetageren indfører prøveblandingen i den mobile fase (tryksat blanding af opløsningsmidler såsom vand, acetonitril og/eller methanol), som overfører den til søjlen. Pumperne leverer det ønskede flow og sammensætning af den mobile fase gennem søjlen. Søjlen er fyldt med adsorbenten, som er en kornet fast partikel såsom silica eller polymerer. Detektoren frembringer et signal, der er proportion alt med mængden af tilstedeværelse af prøvebestanddele i søjlen, hvilket giver mulighed for kvantificerbar analyse af de udvalgte prøvebestanddele. HPLC-instrumentet styres, og dataanalyse leveres af en digital mikroprocessor og brugersoftware.
Figur 1: Diagram af HPLC-instrument
LCMS: Diagrammet for LCMS-instrumentet er givet i figur 2. Prøveekstraktet indsættes i kolonnen bestående af HPLC. Denne kolonne beholder prøvemetabolitter baseret på fysiske karakterer, og forskellige metabolitter strømmer til massespektrometeret med forskellige tidsintervaller. Massespektroskopi bruges til at vurdere masser af partikler, til at bestemme elementarrangementet af et molekyle og til at afklare molekylets strukturer. Imidlertid bør prøven ioniseres for at generere ladede molekyler for at bestemme deres masse-til-ladning-forhold. Derfor består LCMS i stedet for HPLC-instrumenter yderligere tre moduler såsom jernkilde, en masseanalysator og en detektor. En ionkilde kan omdanne gasfaseprøve til ioner og en masseanalysator, der grupperer ionerne efter deres masser ved hjælp af elektromagnetiske felter. Endelig kvantificerer en detektor værdierne og leverer data for hver ion, der er til stede i prøven. LCMS-teknikken kan bruges til både kvalitative og kvantitative applikationer.
Figur 2: Diagram over LCMS-instrument
Afslutningsvis er HPLC en væskekromatografimetode, hvorimod LCMS er en kombination af væskekromatografi og massespektrometri. Begge disse analyseteknikker har forskellige karakteristika, men de kan bruges til at identificere og kvantificere fødevaresammensætninger, lægemidler og andre bioaktive molekyler.
